Diagnóstico molecular temprano de Chagas vertical por LAMP a partir de muestras de sangre líquida y en soporte sólido: Transferencia a instituciones de salud pública en América Latina

Abstract

El control de la transmisión materno-fetal del Trypanosoma cruzi, causante de Chagas vertical (ChV), es prioridad en salud pública, pues esta forma de transmisión es más frecuente en donde se ha logrado el control vectorial o en regiones no-endémicas, siendo identificable al nacimiento y tratable con alta eficiencia y probabilidad de demostración de cura en el corto plazo. Se planteó la validación analítica y transferencia de la amplificación isotérmica mediada por asas (LAMP) para diagnóstico molecular temprano de ChV en centros de salud pública en áreas endémicas. Métodos: Se optimizó la metodología evaluando combinaciones de métodos rápidos de extracción de ADN acoplados al LAMP, adaptables a laboratorios ubicados en maternidades en áreas endémicas: 1. PURE (Eiken Chemical Co, Japón) y 2. PrinterLab (impresora 3D modificada, AI BioSciences, EEUU). Se emplearon muestras de sangre humana seronegativa inoculada con T. cruzi de cultivo (cepas TcI, TcII y TcVI) en heparina como anticoagulante (30 µls) o en porciones de sacabocados de 3- y 6-mm de spots de 125 µl en tarjetas FTA® (Qiagen, UK) o 30 µls en Whatman 903™ (GE Healthcare, UK). Se comparó la amplificación empleando baños térmicos AccuBlock TM (LabNet, EEUU) o incubador Loopamp LF-160 (Eiken) y visualización a ojo desnudo, usando el dispositivo LF-160 o visor fluorescente P51(minipcr bio ®,EEUU). Las mejores condiciones mostraron un límite de detección (LoD95) en al menos 20 réplicas de 5 y 20 parásitos/mL, para sangre-heparina y FTA, respectivamente. El papel Whatman fue descartado por arrojar resultados falsos positivos. Se realizó la transferencia del LAMP y capacitó personal de 11 maternidades del sistema público de salud: Combinación PURE-LAMP (LF-160) a 5 sitios de Bolivia, 2 Paraguay y 2 Argentina y PURE-LAMP (AccuBlock – P51) a 2 maternidades argentinas. Se construyeron paneles de aptitud como sistema de control externo de calidad del LAMP para laboratorios participantes. Se transfirió la metodología LAMP para diagnóstico de ChV a maternidades de área endémica, en proceso de validación clínica. De demostrarse una certeza diagnóstica similar a la PCR podría considerarse método rápido de diagnóstico molecular en puntos de atención e incorporarse al algoritmo diagnóstico de ChV.