Caracterización histopatológica ex vivo de la adherencia de cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga al colon de bovinos

Abstract

Las cepas de Escherichia coli productoras de toxina Shiga (STEC) son reconocidas como responsables de enfermedades de alto impacto en salud pública, como el síndrome urémico hemolítico. El bovino es el principal reservorio de la bacteria y el estudio de la interacción huésped-patógeno es fundamental para la intervención a nivel de control. Teniendo en cuenta la importancia de los serotipos O157 y no-O157, nos planteamos como objetivo el análisis histopatológico de explantes de colon posterior de ganado bovino, inoculados con STEC O157:H7 y O91:H21 LAA-positiva. Se efectuaron dos ensayos. En cada uno, dos explantes por cepa se colocaron sobre esponjas estériles en placas de poliestireno con medio RPMI 1640 y se inocularon con 25μl de un caldo LB conteniendo 2 x 107UFC de cada uno de los serotipos mencionados. Tras la inoculación, se incubaron en agitación a 37°C en una atmósfera con 5% CO2. Los tiempos de incubación fueron de 3h y 6h. Como control negativo, se cultivaron explantes sin inocular. Luego de cada incubación, los explantes se fijaron en formol bufferado 10% y se procesaron con técnica histológica de rutina para inclusión en parafina. Se realizaron cortes seriados de 5μm que se colorearon con hematoxilina de Mayer y Eosina y Giemsa. En las muestras control se observó la histoarquitectura normal, sin presencia bacteriana. En las muestras inoculadas se detectaron bacterias adheridas y alteraciones tanto celulares como estructurales en el epitelio de revestimiento tales como desorganización (pérdida del orden normal de las células) y vacuolización (aspecto claro del citoplasma de las células). Se observó como principal diferencia entre ambos serotipos, una marcada descamación de células epiteliales con el serotipo O157:H7. Estos ensayos preliminares realizados con los serotipos O157:H7 y O91:H21 LAA-positiva, indican que ambos colonizan el intestino bovino, mientras que cada uno genera alteraciones histopatológicas ex vivo con características propias.