Selección de Agaricomycetes nativos de la selva paranaense secretores de enzimas proteolíticas con actividad fibrinolítica

Abstract

El mal funcionamiento del sistema plasminógeno/plasmina para disolver el trombo, dejando grandes residuos adheridos en las paredes endoteliales y otros circulando que pueden causar ataques al corazón y otras enfermedades cardiovasculares, son una de las principales causas de muerte en el mundo. Muchos de los productos utilizados en terapia clínica trombolítica presentan desventajas tales como, baja especificidad sobre fibrina y costos relativamente altos. Por ello, el creciente interés en la obtención de las proteasas fibrinolíticas con costo reducido y con características farmacológicas apropiadas, ha llevado a buscar nuevas fuentes de obtención de las mismas, cobrando gran importancia aquellas producidas por microorganismos. En este sentido, los Agaricomycetes son productores de enzimas proteolíticas extracelulares con actividades fibrinolítica. El objetivo de este trabajo fue seleccionar cepas de Agaricomycetes nativos de la selva Paranaense capaces de secretar enzimas proteolíticas con actividad fibrinolítica. Para ello, se realizó un screening para determinar la actividad proteolítica y fibrinolítica de 35 cepas de Agaricomycetes nativas de la selva Paranaense, pertenecientes al cepario Laboratorio de Biotecnología Molecular (InBioMis). Los hongos se activaron en medio solido conteniendo: 12,7 g/l extracto de malta y 17 g/l agar, durante 5 días a 28ºC. A partir del cual se cortaron tacos de 7 mm de micelio joven y se inoculó en 20 ml de medio nutritivo conteniendo: 35 g/l glucosa, 5 g/l peptona de soja, 5 g/l extracto de carne, 2 g/l NaCl, 0,5 g/l KH2PO4 y 0,5 g/l MgSO4·7H2O, e incubados 7 días a 28ºC. El sobrenadante de cultivo se separó del micelio por centrifugación a 10.000 rpm durante 10 min. La actividad proteolítica se determinó en placas de Agar-Leche descremada. En cada placa se realizaron pocillos de 5 mm, en los cuales se colocó 10 μl de sobrenadante y se incubó a 37ºC por 24 h. La actividad proteolítica se determinó por la presencia de halos de degradación. La actividad fibrinolítica se reveló mediante el método de placa de fibrina de Astrup & Mullertz (1952). De las 35 cepas analizadas, 12 revelaron actividad proteolítica; de las cuales 2 presentaron actividad fibrinolítica. Ambas cepas, pertenecientes al género Schizophyllum, fueron seleccionadas con el fin de optimizar la producción enzimática para aplicarlas como agentes trombolíticos.