Desarrollo de una metodologia cuantitativa de analisis para la determinacion de aminoacidos aromaticos y niveles residuales de glifosato y ampa en soja convencional y transgenica mediante UHPLC-MS/MS

Abstract

La soja (Glycine max) es una de las oleaginosas más importantes en el mercado internacional que se cultiva principalmente por su semilla, la cual es usada comercialmente como alimento debido a su alto contenido proteico de elevado valor nutritivo, así como también para la extracción de aceites. En el cultivo de la soja se emplea el herbicida de amplio espectro glifosato (N-fosfonometilglicina, C3H8NO5P) para el control de malezas durante la mayoría de las etapas del cultivo1. Este herbicida es aplicado intensivamente, principalmente en cultivos de soja transgénica (RR), resistentes a la acción del mismo. La acción de glifosato en malezas está relacionada a la inhibición de la producción de los aminoácidos aromáticos fenilalanina, triptófano y tirosina (Phe, Trp, Tyr), lo que a su vez genera la desregulación negativa en la síntesis de fenilpropanoides, ocasionando la muerte de las malezas2. Debido al carácter esencial de los aminoácidos mencionados, el objetivo de este trabajo consistió en evaluar el cambio en el perfil de concentración de los aminoácidos aromáticos libres por la acción del glifosato en hojas y granos de soja transgénica y no transgénica, además del monitoreo del glifosato residual y su metabolito de degradación ácido aminometilfosfónico (AMPA)3. De acuerdo al objetivo planteado, se desarrolló una metodología cromatográfica-espectrométrica de elevada sensibilidad y selectividad para la cuantificación de los aminoácidos aromáticos, de glifosato y de AMPA en las muestras mencionadas. Las muestras de hojas y granos de soja se obtuvieron en el marco del proyecto de mejoramiento realizado en la estación experimental del Instituto Nacional de Tecnología Agrícola (INTA) de Marcos Juárez, Córdoba. Para evaluar el efecto/concentración residual de glifosato y AMPA sobre los aminoácidos aromáticos bajo estudio, se adicionó una dosis de 2 L/ha a partir de un stock de 48% (m/v) de compuesto activo del herbicida sobre un genotipo de soja transgénica (J081201) y no transgénica (Alim 105.13). Las dosis del herbicida se aplicaron en la etapa fenológica R7 de la soja de ambos genotipos. Se tomaron muestras a los 2 y 5 días de aplicación de glifosato en condiciones de cultivo. Las muestras de hojas y granos de soja fueron colectadas y almacenadas a – 80 ºC hasta su uso. En cuanto al procedimiento de tratamiento de las muestras, se ensayaron diversas alternativas de extracción líquido-líquido con el fin de lograr la mayor eficiencia extractiva de los analitos bajo estudio. Los extractos obtenidos fueron divididos en dos alícuotas, una de las mismas se filtró y se inyectó directamente al sistema cromatográfico para el análisis de los aminoácidos aromáticos. Para la segunda alícuota y con el fin de mejorar la retención cromatográfica, el glifosato residual y el AMPA fueron derivatizados por medio de la reacción con 9-fluorenilmetilcloroformiato (FMOC)