Caracterización genotípica y fenotípica de cepas colicinogénicas de Escherichia coli

Abstract

Escherichia coli forma parte de la biota normal del tracto intestinal en animales y humanos. Aunque algunas cepasproducen enfermedades severas como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico; otras sintetizan péptidosantimicrobianos llamados colicinas. Estas, son capaces de inhibir el crecimiento de cepas relacionadas filogenéticamentecon ellas, codificadas por plásmidos denominados pCol, se clasifican en tres grupos en función de su tamaño: colicinas(25-80 KDa); microcinas (<10 KDa) y colicinas tipo fago. En el presente trabajo se realizó la caracterización fenotípicay genotípica de cepas colicinogénicas aisladas de muestras de colon bovino con capacidad inhibitoria sobre E. coliO157:H7. Se realizó la extracción de ADN plasmídico con un kit comercial (Inbio-Highway®) y fue revelados en geles deagarosa al 1% teñidos con Bromuro de Etidio. Se obtuvieron dos perfiles distintos de plásmidos compartidos por lascepas en estudio. Se caracterizó fenotípicamente la producción de las colicinas mediante cultivo en medio Luria Bertani(LB) inoculado con 105 UFC/ml con cada una de las cepas en estudio, se incubó a 37°C en agitación y se tomaron alícoutasde 1,5 ml cada hora, se centrifugaron en dos instancias (a 3500 rpm y a 12000 rpm), se recolectó el sobrenadante yse filtró con filtros millipore de 0,20 µm. De esta forma se obtuvo el sobrenadante libre de células (SLC). Se probó suactividad inhibitoria realizando ensayos de inhibición en placa, sembrando 5 µl del SLC en placas de agar LB y vertiendosobre ellas 5 ml de LB agar al 0,7% conteniendo 105 UFC/ml de una cepa O157:H7. Se observó que en dos de las cepascolicinogénicas, la inhibición se produjo en el tiempo correspondiente a la fase estacionaria, mientras que, en otra deellas, la inhibición se produjo en la fase exponencial. Estos resultados deben tenerse en cuenta para el potencial uso debacterias colicinogénicas o de sus colicinas, como agentes de control biológico contra cepas patógenas de E. coli.