Nebulización de una formulación basada en anticuerpos específicos para su potencial aplicación en el control de la infección con virus Influenza H1N1. Caracterización aerodinámica y funcional.

Abstract

Las infecciones del tracto respiratorio inferior (LRTI) son una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el mundo, especialmente en niños pequeños y adultos mayores. El virus influenza es el responsable del 11,5% de los casos con mayor incidencia en los grupos mayores de 70 años. La inmunización pasiva utilizada en el tratamiento de infecciones respiratorias, es capaz de reducir significativamente la mortalidad y los requisitos de ventilación mecánica sin presentar efectos adversos graves en pacientes con infecciones virales respiratorias agudas. La administración local de anticuerpos específicos por inhalación, permite el acceso directo al tracto respiratorio reduciendo los efectos secundarios sistémicos a dosis menores. Nuestro grupo demostró el efecto profiláctico contra el virus influenza H1N1, ejercido por la inmunoterapia de anticuerpos específicos (plasma/nanoanticuerpos) administrados por la vía intranasal en el modelo ratón. Anteriormente, demostramos que la técnica ELISA de hemaglutinina viral (HA) resultaba apropiada para evaluar la estabilidad de los anticuerpos recuperados luego de la nebulización de plasma inmune por tecnología JET. En este trabajo, investigamos si la administración local, permite lograr una distribución homogénea de anticuerpos específicos en el tracto respiratorio, comparando el rendimiento de dos tecnologías de nebulización JET y MESH. En primer lugar, se analizó el comportamiento aerodinámico de una formulación de plasma inmune en buffer fosfato pH 7.4 (relación 1:3). Se realizaron nebulizaciones por triplicado para ambas tecnologías y mediante un sistema de impacto en cascada (NGI-Copley), se clasificaron las gotas de la dosis emitida según su diámetro aerodinámico. De especial interés resultaban las gotas con diámetros menores a 5 μm, dado que éstas son las que componen la fracción inhalable capaz de alcanzar el tracto respiratorio inferior. Los valores de los parámetros aerodinámicos mostraron una correcta aerosolización y deposición de las partículas nebulizadas para ambas tecnologías. Entre ellos la fracción fina de partículas (FFP) o el porcentaje de gotas con rango de diámetro aerodinámico entre 5 y 1 μm resultó más favorable con la tecnología JET que para MESH (52.3 para JET vs 36.2 para MESH). Además, se observó un mayor porcentaje de recuperación proteica (3%) con la tecnología JET. Posteriormente, el estudio de funcionalidad mediante un ELISA de HA, arrojó para ambas tecnologías, una detección efectiva de anticuerpos señalando la estabilidad del plasma luego de la nebulización. En conjunto, estos resultados indican que la formulación de plasma inmune pudo ser nebulizada con alto rendimiento permitiendo que los anticuerpos conserven su actividad específica. Es más, el uso de la tecnología JET alcanzó un mejor rendimiento, en cuanto al comportamiento aerodinámico y la cantidad de proteínas totales colectadas