Efecto del virus de leucosis bovina (BLV) en células epiteliales mamarias bovinas infectadas in vitro

Abstract

Introducción y objetivos: El virus de la leucosis bovina (BLV) es un Deltaretrovirus que infecta principalmente linfocitos B causando una enfermedad linfoproliferativa en el ganado bovino. El virus afecta la respuesta inmune de los animales infectados y previamente se ha demostrado que puede infectar células del epitelio mamario bovino. Estudios anteriores sugieren que los animales infectados con BLV podrían tener una mayor incidencia de mastitis. El objetivo de este trabajo es analizar el efecto de la infección por BLV sobre la viabilidad y la expresión de ARNm de uno de los receptores tipo Toll (TLR2) en el epitelio mamario bovino antes y después de la exposición in vitro a {S. aureus}, una de las bacterias que causa mastitis crónica en el ganado bovino. Materiales y métodos: La línea celular mamaria epitelial bovina MAC-T fue persistentemente infectada con BLV (MAC-T BLV). Para los experimentos de estimulación con bacterias, se utilizó una suspensión de {S. aureus} ATCC 29213 (OD = 0.3) inactivada por calor. La viabilidad de las células MAC-T y MAC-T BLV fue analizada por el método de MTT. Para el análisis de expresión de genes, la extracción de ARN se hizo con Direct-zol RNA MiniPrep Plus (Zymo Research, USA). La transcripción reversa se realizó con iScript? cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad, California, USA) y la PCR en tiempo real se llevó a cabo usando la mix SsoAdvanced Universal SYBR® Green Supermix (Bio-Rad, California, USA) en el equipo de Applied Biosystems. Los datos se analizaron usando LingReg y FgStatisitcs.Resultados: La infección por BLV reduce la viabilidad en un 27,85% comparado con las células no infectadas cuando se analiza por MTT. En presencia de {S. aureus}, la viabilidad de MAC-T BLV se reduce en un 15,38% a las 3 h, un 25,90% a las 6 h y un 26,46% a las 18 h en comparación con las células MAC-T. Las células epiteliales mamarias infectadas in vitro con BLV expresan 0,28 veces menos ARNm de TRL2 que el control MAC-T (p=0,01946); sin embargo, esta diferencia no fue estadísticamente significativa. La expresión de TLR2 está disminuida 0,28 veces (p=0,029) luego de 3 h de incubación con {S. aureus}, 0,24 veces (p=0,0428) luego de 6 h y 0,58 veces (p=0,0849) luego de 18 h.Conclusión: La infección por BLV reduce la viabilidad de las células epiteliales mamarias bovinas antes y después de la exposición a la bacteria {S. aureus}. El TLR2 es uno de los TLR más promiscuos respecto a la capacidad de reconocer patrones de patógenos, probablemente debido a que actúa en combinación con otros TLRs. La infección de las células epiteliales mamarias bovinas con BLV disminuye la expresión de ARNm de TLR2 cuando las células son expuestas a {S. aureus} previamente inactivado por calor. Esto, sumado a la disminución en la viabilidad celular, podría afectar la capacidad de reconocimiento de patógenos en la glándula mamaria y por lo tanto la respuesta inmune de la misma, favoreciendo el desarrollo de mastitis en animales infectados con BLV.