Eficacia de un compuesto comercial de amonio cuaternario sobre levaduras aisladas de equipos de ultrafiltración de industrias jugueras

Abstract

Las levaduras son las principales colonizadoras de superficies de producción en industrias jugueras, afectando la calidad y disminuyendo los rendimientos productivos. Si bien los compuestos de amonio cuaternario (CAC) reducen biofilms bacterianos y fúngicos, los métodos químicos de control microbiano son a menudo ineficaces para erradicar biofilms ya que las células adheridas presentan mayor resistencia que aquellas en estado planctónico. El objetivo fue determinar la efectividad de un CAC comercial (cloruro de benzalconio al 4%) sobre Candida tropicalis, C. krusei, C. kefyr y Rhodotorula mucilaginosa, aisladas de membranas de ultrafiltración de una industria juguera, en estado planctónico y formando biofilms. Los ensayos sobre células planctónicas se llevaron a cabo utilizando el método de microdilución, colocando 180 μL de suspensión ajustada (105 UFC/mL) de cada especie más 20 μL de desinfectante en distintas concentraciones (0,01-0,4%), durante 5, 10, 15 y 30 minutos. Los biofilms monoespecie se formaron durante 24h a 25°C sobre superficies de acero inoxidable AISI 314 de 1 cm2 , empleando una suspensión ajustada (106 UFC/mL) en jugo de manzana (12°Brix). Las superficies se enjuagaron con agua destilada y se agregaron 2 mL del desinfectante al 0,1 y 0,2% durante 10 y 30 minutos, respectivamente. Transcurrido el tiempo de contacto, se neutralizó con 2 mL de una solución de PBS+lecitina de soja (2,5%)+Tween 80 (2%). Los recuentos celulares se llevaron a cabo en agar YGC (48h, 25˚C) y se estableció la eficiencia microbicida (EM) expresada en porcentaje. Finalmente, se evaluó la recuperación de las células en biofilms multiespecie tratados con 0,2% de CAC por 30 min, e incubados en jugo de manzana a 25°C durante 24, 48 y 72h. En todos los casos, la EM para las células planctónicas fue del 100% con 0,04% de CAC y 30 min de exposición. Con concentraciones de 0,2% durante 10 min y 0,1% durante 30 min, la EM osciló entre 64 y 79 % en biofilms monoespecie, y entre 58 y 64% en los biofilms multiespecie. Los biofilms multiespecie tratados con 0,2% de CAC por 30 min e incubados con jugo de manzana, no presentaron crecimiento luego del tratamiento de desinfección, pero a las 24, 48 y 72 h, se obtuvieron recrecimientos de 2,99 ± 0,59, 2,82 ± 0,26 y 5,49 ± 0,88 Log UFC/cm2 , respectivamente. Podemos concluir que el CAC en las condiciones evaluadas, es un agente desinfectante efectivo a bajas concentraciones sobre células planctónicas. En el caso de biofilms, tanto mono como multiespecie, no se logró una EM del 100% aún con concentraciones y tiempos superiores a los recomendados por el fabricante (0.1%, 10 min). Por otra parte, con un resultado inicial eficiente de desinfección y con tiempos y concentraciones superiores a los recomendados por el fabricante (0,2%, 30 min), las células persisten en las superficies luego de la desinfección, pudiendo generar nuevos biofilms en cada ciclo de producción del alimento.