Modificación de la técnica de preparación de muestras de Hypogeoccocus spp. (insecta: hemiptera) para microscopía electrónica de barrido utilizando hexametildisilazano

Abstract

El género Hypogeococcus Rau (Hemiptera: Coccomorpha: Pseudococcidae), incluido entre las llamadas “cochinillas harinosas”, es un grupo de insectos fitófagos que posee 11 especies a nivel mundial, de las cuales cuatro se encuentran en Argentina asociadas a diferentes familias vegetales. Algunas fueron utilizadas como controlador biológico de cactáceas en Australia y Sudáfrica. Actualmente es una plaga muy importante (quizás introducida accidentalmente) de cactus nativos de Puerto Rico y otras islas del Caribe. Debido a que estas especies son pequeñas y crípticas, la identificación muchas veces es errónea. Las técnicas tradicionales para microscopía electrónica tienen la desventaja de estropear las muestras de cochinillas haciendo difícil la observación de caracteres taxonómicos. El objetivo de este trabajo es presentar un protocolo modificado para la observación de muestras de Hypogeococcus en MEB. Se trabajó con hembras adultas de Hypogeococcus spp. recolectadas en Argentina, Paraguay, Brasil y Estados Unidos y fijadas en alcohol 96°. Las observaciones se realizaron en el “Centro de Investigaciones y Servicios de Microscopía Electrónica” (CISME-CONICET) utilizando un microscopio electrónico de barrido (Zeiss SUPRA 55-VP). Se llevó a cabo el protocolo siguiendo los pasos tradicionales de limpieza con xilol y acetona, hidratación y deshidratación con baterías de alcohol y acetona; para el secado, en cambio, se sumergieron las muestras en hexametildisilazano (HMDS) durante cinco minutos y dejándolas secar a temperatura ambiente. Al reemplazar la técnica de punto crítico por el HMDS, se obtuvieron mejoras significativas en las observaciones ya que los ejemplares no presentaron signos de encogimiento o colapso de la pared del insecto, pudiendo reconocer estructuras clave para la identificación como setas, cerarios, poros, etcétera. La utilización de xilol y acetona produjo muestras más limpias. Esto permite la correcta identificación de las especies del género Hypogeococcus y la implementación de estrategias para la conservación de los bosques secos de Puerto Rico