Cultivo de células luteales porcinas como sustrato para la maduración in vitro de complejos cumulus ovocito porcinos: Establecimiento y caracterización

Abstract

El objetivo de este trabajo fue establecer y caracterizar el cultivo de células luteales porcinas (CLP) para el posterior cocultivo de COC porcinos con el fin de promover la maduración ovocitaria. Para el establecimiento y caracterización del mismo se realizó la disección de cuerpos lúteos obtenidos a partir de ovarios de frigorífico. El tejido luteal se sometió a digestión mecánica y enzimática con colagenasa IV. La suspensión se filtró y centrifugó y las células se diluyeron en 15 mL de medio DMEM/F12 suplementado y se sembraron en 3 frascos de cultivo T25, incubándose en ambiente controlado y renovando el medio cada 48 h. Para el análisis y caracterización del mismo se realizó la evaluación del contenido de lípidos intracelulares por tinción con rojo Nilo, inmunocitoquímica (ICQ) para 3β-hidroxiesteroide Deshidrogenasa (3β-HSD) y determinación de progesterona (P4) por ELISA. Se observó la presencia de gotas lipídicas citoplasmáticas, una producción de P4 en forma creciente medida a las 48, 96 y 144 h de cultivo y casi la totalidad de las células positivas a 3β-HSD, demostrando la capacidad esteroidogénica de las células en cultivo.