Caracterización de secuencias peptídicas de fracción antioxidante de Caupí

Abstract

El caupí (Vigna unguiculata (L.) Walp.), una leguminosa de alto valor proteico (23-26%) cultivada en el Nordeste Argentino, representa una materia prima prometedora para la obtención de péptidos bioactivos. Luego de su liberación mediante hidrólisis enzimática, estos péptidos pueden ejercer efectos beneficiosos para la salud tales como actividad antioxidante (AAox), siendo de gran interés para su incorporación en alimentos funcionales. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar secuencias de péptidos con potencial antioxidante en hidrolizados de proteínas de caupí. A partir de harina de semillas de caupí se obtuvo un aislado proteico (A10) por extracción alcalina (pH 10,0) y precipitación isoeléctrica. Posteriormente, el aislado fue hidrolizado con alcalasa (8 µL alcalasa/100 mg A10, 37 °C, 4 h) para generar el hidrolizado (A10HH), se midió el grado de hidrólisis (GH)1 y la AAox por neutralización del catión radical ABTS, capacidad de absorción de radicales del oxígeno (ORAC) y del radical OH (HORAC)2. A10HH se fraccionó por cromatografía de exclusión molecular (CEM) (Superdex 30; cut-off < 10 kDa) y se determinó la AAox de las fracciones por el método ORAC. La fracción con mayor actividad fue digerida con tripsina y analizada por espectrometría de masas (EM; nanoLC-ESI-ORBITRAP) para identificar secuencias. El GH fue de 24,1±1,1%. A10HH mostró una AAox significativamente mayor que A10 por los tres métodos. El fraccionamiento de A10HH por CEM permitió separar péptidos en diferentes rangos de peso molecular. La fracción 5hh (0,63-1,44 kDa) presentó la mayor AAox (IC50 ORAC=7,0 µg/mL). El análisis por EM permitió identificar dieciséis secuencias peptídicas provenientes de cuatro proteínas de caupí: dos "RmlC-like jelly roll fold", una "Ribulose bisphosphate carboxylase large chain" y una "Actin beta/gamma 1". Se propusieron trece secuencias de los péptidos originales (según la especificidad de corte de la alcalsa). Estas secuencias contienen principalmente aminoácidos hidrofóbicos3 (Leu, Val, Ala) y aromáticos (Tyr), o presencia de péptidos cortos que se han correlacionado positivamente (Biopep)4 con la AAox. La hidrólisis de proteínas de caupí con alcalasa es un método efectivo para generar péptidos con alta capacidad antioxidante. Estos hallazgos abren la posibilidad de utilizar los hidrolizados de caupí o algunos péptidos identificados como ingredientes funcionales con propiedades antioxidantes para la industria alimentaria.