Diseño de protocolos de extracción de ARN y detección de virus por RT-PCR en hojas y bulbillos de ajo (Allium sativum L.)

Abstract

El ajo (Allium sativum L.) es un cultivo de importancia a nivel mundial, siendo relevante en la provincia de Mendoza. El cultivo es afectado por un complejo viral que incluye Potyvirus (Onion yellow dwarf virus - OYDV y Leek yellow stripe virus - LYSV), Carlavirus (Shallot latent virus - SLV) y Garlic common latent virus - GCLV) y Allexivirus (Garlic virus A, B, C, D, E y X - GarVA, GarVB, GarVC, GarVD, GarVE y GarVX) que impacta en su calidad y rendimiento. Tradicionalmente la detección viral, tanto en la producción de ajo semilla saneada de virus como en cultivos comerciales, se realiza mediante la técnica serológica ELISA, pero se ha avanzado hacia técnicas moleculares más sensibles como la RT-PCR. Este trabajo tiene por objetivo desarrollar protocolos de detección de virus mediante RT-PCR a partir de hojas y dientes de ajo. Para ello se compararon diferentes métodos de extracción de ARN, se evaluó la calidad del ARN obtenido, el tratamiento con DNasas, la síntesis de ADNc y se ajustaron las RT-PCR para los diferentes cebadores utilizados. Se ajustaron tres métodos de extracción de ARN, se logró la obtención de ADNc y se detectó la presencia de virus en el cultivo a través de RT-PCR, posibilitando realizar diagnósticos virales más precisos, que contribuyen al desarrollo de una cadena productiva de ajo semilla de sanidad controlada.