Efecto de tilmicosina sobre el metabolismo dependiente de la subfamilia citocromo P450 3A (CYP3A): estudio in vitro en cortes laminares de tejido hepático bovino

Abstract

Los macrólidos son antimicrobianos de elevada liposolubilidad y con altos coeficientes de penetración tisular. El metabolismo hepático de estos fármacos involucra reacciones de hidroxilación y de N-desalquilación, presumiblemente catalizadas por isoenzimas de la subfamilia citocromo P450 3A (CYP3A). Además, en diferentes estudios in vitro se confirmaron las propiedades inhibitorias de algunos macrólidos sobre la actividad catalítica de la dicha subfamilia CYP3A. El objetivo del presente trabajo consistió en evaluar in vitro la capacidad del macrólido tilmicosina para inhibir el metabolismo CYP3A-dependiente utilizando cortes laminares de tejido hepático de bovinos como modelo de estudio. Se obtuvieron muestras del parénquima hepático de tres (3) bovinos. Se prepararon cortes laminares (slices) de tejido hepático (~20 mg) operando un micrótomo Brendel-Vitron® sumergido en un buffer Krebs oxigenado (O2/CO2: 95/5). Los slices fueron incubados (37°C) durante 6 h en el medio de cultivo E de Williams (Merck) bajo una atmósfera de O2/CO2 (95/5). La viabilidad del tejido hepático se evaluó por histopatología y a través de la medición del contenido tisular de glutatión reducido (GSH) y oxidado (GSSG). Los cortes laminares se incubaron con testosterona (200 µM) en ausencia (controles) y en presencia de tilmicosina (0.75 y 7.5 µg/mL). Para cada condición, se incubaron 3 slices de cada muestra de parénquima hepático. Se obtuvieron muestras del medio de cultivo entre 1 y 6 h para ser analizadas por HPLC. La actividad catalítica de CYP3A fue cuantificada mediante el cálculo de las tasas de aparición (nmol/h) de los metabolitos 6-beta- y 16-beta-hidroxitestosterona en el medio de incubación. Las tasas de aparición fueron lineales hasta las 4 h de incubación para el primer metabolito y hasta las 6 h para el segundo. En las incubaciones control, la tasa de aparición fue de 2.6±0.5 nmol/h y 2.1±0.6 nmol/h para los metabolitos 6-beta- y 16-beta-hidroxitestosterona, respectivamente. Contrariamente a lo esperado, lo cual era una inhibición de la actividad metabólica con ambas concentraciones de tilmicosina, solamente se observó este efecto (40%, p<0.05) sobre la formación CYP3A-dependiente del metabolito 16-beta-hidroxitestosterona (1.3±0.7 nmol/h) en presencia de 7.5 µg/mL de tilmicosina en el medio de cultivo. En conclusión, se observó un efecto inhibitorio, pero también un efecto de inducción en algunos casos, por lo que se debería analizar prolongar los tiempos de incubación, para ver si el resultado varía. También es interesante analizar la utilización de macrólidos de mayor potencia como la tulantromicina y gamitromicina. Existen diferentes mecanismos de inhibición de las enzimas que metabolizan xenobióticos. Los macrólidos y otros antimicrobianos como la tiamulina tienen la capacidad de inhibir los citocromos de la subfamilia CYP3A mediante la formación de complejos metabólicos estables a nivel del sitio activo de estas enzimas. Dado que dichos complejos también se forman in vivo, existe la posibilidad de interacciones farmacológicas de importancia clínica por inhibición de la actividad catalítica de CYP3A. El estudio de potenciales interacciones metabólicas entre macrólidos y otros fármacos continúa en evaluación en nuestro laboratorio.