Efecto del NaF sobre la infección del fago Stx2 ArgO145

Abstract

Las toxinas Shiga (Stxs) son consideradas el principal factor de virulencia de STEC y responsables de las características patológicas como también de las complicaciones severas de la infección. Están codificadas por bacteriófagos (fagos Stx), los cuales juegan un rol importante en la regulación de la producción de toxina, en la diseminación de los genes stx y en la emergencia de nuevas cepas STEC. Análisis bioinformáticos de genomas de fagos Stx2a mostraron que la región donde se encuentra localizado el gen stx es muy conservada y codifica, adyacente a stx2a, una sialato O-acetil esterasa denominada NanS-p. Ensayos previos en nuestro laboratorio mostraron que la expresión de nanS-p se incrementa en respuesta a la inducción con mitomicina C, de manera similar a stx2a. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del NaF, inhibidor de algunas esterasas, en la infección de los fagos Stx2a. Se seleccionó el fago ArgO145, el cual fue aislado a partir de una cepa STEC 0145, secuenciado y caracterizado en estudios previos. Se generó un lisógeno utilizando la cepa E. coli WG5 como hospedadora y se evaluaron concentraciones de NaF que no tuvieran efecto negativo sobre el crecimiento de E. coli WG5. Se cultivó la cepa lisógena en caldo LB con mitomicina C. Los sobrenadantes filtrados (poro de 0,22 µm) del cultivo se incubaron 1:1 con NaF 1M (o agua como control negativo) y se titularon los fagos mediante el ensayo de doble capa de agar. Los resultados mostraron una marcada disminución en el título de fagos incubados con NaF. El efecto del NaF podría estar asociado a la inhibición de la actividad de NanS-p, por lo cual se requieren estudios específicos que determinen si NanS-p cumple un rol en la infección de fagos Stx2a.