Actividad de fosfatasa alcalina en intestino anterior del lenguado Paralichthys Orbignyanus: caracterización parcial

Abstract

A pesar de la importancia ecológica y gran potencial para la acuicultura de Paralichthys orbignyanus faltan estudios sobre fisiología bioquímica digestiva y metabólica, en particular sobre existencia y características de enzimas claves en tracto digestivo tales como fosfatasa alcalina (AP). Determinamos la existencia de actividad de AP y realizamos una caracterización parcial en intestino anterior de adultos de P. orbignyanus. Los individuos fueron mantenidos en condiciones controladas de salinidad, fotoperiodo, temperatura y alimentación (41,8% hidratos de carbono; 2,8% lípidos; 46% proteínas). Para los ensayos, fueron privados de alimento 24 hs, Se trabajó con homogenatos de intestino anterior (buffer Tris/HCl 50 mM pH 7,4, 0°C; 4 ml g-1 de tejido). La actividad de AP se determinó por hidrólisis de p-nitrofenilfosfato en Tris 100 mM/HCl/SO4Mg 4 mM (curva de pH: 7,4-8,4). La actividad de total de AP (APT) fue similar a pHs 7,4- 8,4, un 54 % mayor a pH 9,0 (1671±113 nmoles pNP x min-1 x mg prot-1) que a pH 8,4. APT a pH 9,0 exhibió cinética michaeliana (Km=0,71 mM) (sustrato:0,5-11mM). El levamisol (inhibidor de AP no específica de tejidos; pero no de AP intestinal) inhibió parcialmente APT a pH 9.0 pero no a pH 7,7. Se caracterizó entonces la actividad de AP a pH 7.7. Esta actividad presentó comportamiento alostérico (sustrato:0,5-15mM). fue similar a 4ºC y 25ºC y aumentó 101% a 37ºC (428±82 nmoles pNP x min-1 x mg prot-1). La inhibición diferencial por levamisol y las diferentes características bioquímicas sugieren la existencia de actividad de AP no específicas y específicas de tejido en intestino anterior de P. orbignyanus. La insensibilidad a levamisol de AP a pH 7,7 sugiere que esta actividad correspondería a AP intestinal. Estos resultados constituyen la primera evidencia de la existencia de actividad de AP en intestino anterior de peces planos del género Paralichthys.