Caracterización de las isoformas de VAMP involucradas en la exocitosis de gránulos corticales en ovocitos de ratón

Abstract

La exocitosis de gránulos corticales (EGC), también conocida como reacción cortical, es un proceso secretorio activado por la unión del espermatozoide y el ovocito durante la fecundación. Durante la EGC se fusionan los gránulos corticales y la membrana plasmática del ovocito. Este proceso es activado por calcio y es mediado por el complejo SNARE, el cual está formado por SNAP-25, sintaxina y VAMP. Sintaxina 4 y SNAP-25 han sido identificadas en ovocito de ratón pero se desconoce si VAMP participa en este proceso. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar las principales isoformas de VAMP involucradas en exocitosis en otros modelos secretorios. Los ensayos de RT-PCR mostraron que VAMP1 y VAMP2 se expresan en ovocitos de ratón. El análisis de inmunofluorescencia reveló que VAMP1 tiene una localización cortical y que VAMP2 tiene una distribución, principalmente, citoplasmática. Estos resultados sugirieron que VAMP1 podría participar en la EGC. Para confirmar esta hipótesis, realizamos un ensayo funcional en el que bloqueamos la función de VAMP1 y VAMP2 endógenas por microinyección de anticuerpos. Sólo el anticuerpo contra VAMP1 inhibió la EGC de ovocitos activados partenogenéticamente con SrCl2. Estos resultados confirman que VAMP1 es la isoforma que participa en la EGC. La importancia de este trabajo es que hemos contribuido a caracterizar el complejo SNARE que participa en la reacción cortical de ovocitos de ratón.