Alteraciones en la arquitectura del biofilms de Candida tropicalis: Efecto de un nuevo compuesto con actividad antifúngica

Abstract

Se ha descripto que las infecciones por Candida asociadas a biofilms son clínicamente relevantes debido a la resistencia multifactorial y la tolerancia a los agentes antifúngicos. Nuestro grupo de trabajo ha demostrado previamente que un nuevo compuesto, el oligoestirilbenceno 14 (OSB14) presentó actividad antibiofilm y efecto sinérgico asociado a anfotericina B (AmB), con una erradicación del hasta 90% sobre el biofilm {Candida tropicalis}. El objetivo de este trabajo fue evaluar los cambios en la topografía y arquitectura de biofilm maduros de {C. tropicalis} producidos por la acción del compuesto OSB14 y de la asociación sinérgica con AmB. La estructura del biofilm se estudió mediante microscopia óptica (MO) por tinción con cristal violeta y por microscopía confocal de exploración láser (MCEL) utilizando Calcofluor-white. El análisis de las imágenes por MCEL fue realizado utilizando el software ImageJ. La caracterización de la arquitectura y morfología del biofilms se realizó mediante el análisis con el programa COMSTAT, que permitió evaluar y comparar distintos parámetros tales como biomasa, espesor, rugosidad, distancia de difusión y relación biomasa/biovolumen.Por MO se observó que el biofilm formado por {C. tropicalis} NCPF 3111 presentaba blastosporas ovaladas, pseudohifas e hifas verdaderas. El análisis de las imágenes obtenidas del compuesto solo y de la combinación con AmB, por MO y por MCEL, evidenció la reducción de la biomasa total del biofilm con respecto al control sin tratamiento. El análisis COMSTAT del compuesto OSB14 arrojó una reducción de la biomasa del 90% con respecto al control y una reducción del 94% en la combinación sinérgica con AmB (*p<0,05). De la evaluación de los parámetros de COMSTAT se obtuvo que, tanto la combinación como el antifúngico usado como referencia (AmB), presentaron el menor espesor del biofilm y de la distancia de difusión. Además, con el compuesto OSB14 el coeficiente de rugosidad fue mayor al control y similar a la combinación con AmB. La información obtenida resulta relevante para poder comprender las modificaciones en la arquitectura y en el microentorno de biofilms de {Candida} tratados con este nuevo agente antifúngico, permitiendo profundizar distintos aspectos de su mecanismo de acción.