Estudio Cinético de la reacción de hidrólisis de lecitina de soja pura en polvo con fosfolipasa A2 inmovilizada

Abstract

La enzima fosfolipasa A2 inmovilizada promueve la reacción hidrolítica de lecitina de soja pura en polvo liberando un mol de ácido graso de la posición C-2. El principal propósito de este trabajo fue determinar los parámetros cinéticos de la reacción cuando la enzima fue adsorbida sobre alúmina o sobre DEAE-sephadex. Las mejores condiciones para la reacción son: temperatura 45-48o C: concentración de iones Ca 6mM y pH 8,65. Las concentraciones de sustrato ensayadas fueron 6,3; 12,7; 19 y 25 mM trabajando en un reactor tipo batch y con la enzima inmovilizada. El tiempo de incubación no modificó la actividad enzimática. La actividad hidrolítica de fosfolipasa A2 adsorbida sobre alúmina o sobre sephadex fue menor que la de la enzima soluble porque las propiedades intrínsecas de la enzima se modificaron con la inmovilización. Para concentraciones de sustrato entre 6 y 19 mM las constantes de velocidad para cinética de 1er orden fueron k = 9,88.10-2 min-1 para enzima inmovilizada sobre alúmina y k = 1,766.10-1 min-1 para enzima inmovilizada sobre DEAEsephadex. Para los mismos soportes, pero a mayores concentraciones de sustrato (25mM) las constantes de velocidad para cinética de orden cero fueron k = 1,62.10-3 mol.l-1min-1 (alúmina) y k = 3,58. 10-3 mol.l-1 min-1 ( DEAE-sephadex).Immobilized A2 phospholipase enzyme promotes the hydrolytic reaction of pure powder soybean lecithin releasing a mole of fatty acid from C-2 position. The main purpose of this paper was to determine the kinetic parameters of this reaction when the enzyme was adsorbed on alumina or DEAE-sephadex. The best conditions for the reaction were: temperature: 45-48ºC, Ca ions concentration: 6mM, pH: 8,65. Tested conditions for substrate concentration were: 6,3; 12,7;19 and 25 mM working in a batch type reactor and with the immobilized enzyme. The incubating time did not change the enzymatic activity.The hydrolytic activity of alumina or DEAE-sephadex adsorbed A2 phospholipase enzyme was lower than of the soluble enzyme because the intrinsic properties are modified by immobilization. For substrate concentrations ranging between 6 and 19 mM first order kinetic velocity constants were k = 9, 88. 10-2 min-1 and k = 1,766. 10-1 min-1 for alumina and DEAE sephadex respectively. For the same supports but at higher substrate concentration (25mM) the zero order kinetic velocity constants were k= 1,62. 10-3 mol.l-1. min-1 (alumina) and k = 3,58.10-3 mol.l –1.min-1 (DEAE-sephadex).