Elaboración de sondas moleculares para la detección de virus de yerba mate

Abstract

La yerba mate (Ilex paraguariensis A St‐Hil) es un arbusto perenne originario de América del Sur. En Argentina, se evidenciaron plantas de yerba mate con síntomas virales de amarillamiento, clorosis de nervaduras, moteado, anillos y diseños lineales cloróticos. Análisis mediante microscopía electrónica, técnicas moleculares y secuenciación masiva, permitieron identificar los virus Yerba mate chlorosis-associated virus (YmCaV), perteneciente al género Cytorhabdovirus, Yerba mate-associated circular DNA virus (YMaCV), un virus circular de ADN monocatenario, y otro patógeno viral parcialmente secuenciado, posiblemente de la familia Closteroviridae. El objetivo del trabajo fue elaborar sondas moleculares para la identificación masiva de los virus de yerba mate. Se purificaron productos de PCR amplificados con cebadores específicos, diseñados para cada uno de los virus. Los productos aislados se clonaron y secuenciaron para confirmar la identidad del inserto. A partir de los plásmidos seleccionados se sintetizaron ribosondas para la detección de YmCaV y el posible closterovirus, y una sonda de DNA para el virus YMaCV, utilizando los kits ?RNA Labeling and Detection? y ?DIG DNA Labeling and Detection? (Roche), respectivamente. Para el diagnóstico de plantas de yerba mate, se ajustó la técnica dot blot en nitrocelulosa. Las sondas específicas para YmCaV y YMaCV reaccionaron con los testigos positivos de cada virus, mientras que no reaccionaron con los testigos negativos. La sonda para la detección del posible closterovirus sigue en desarrollo. Este trabajo permitió ajustar una técnica para el diagnóstico masivo de los virus YmCaV y YMaCV.