Cinética de transcriptos de genes inmediatos y tardíos del herpes virus bovino tipo 4 (BoHV-4) en cultivos primarios de endometrio bovino

Abstract

Introducción y Objetivos: La metritis post parto afecta de forma negativa la eficiencia reproductiva en vacas lecheras. Generalmente, los patógenos implicados son Escherichia coli y Trueperella pyogenes, pero la infección viral por herpesvirus (BoHV-4) y el virus de la diarrea viral bovina (vDVB) también son relevantes en la etiología de esta patología. El BoHV-4 es un gammaherpesvirus caracterizado por su baja virulencia y tropismo por las células endometriales. Su replicación exitosa se atribuye a eventos post ingreso a la célula. La activación de manera eficiente del gen Inmediato temprano 2 (IE2) es un desencadenante molecular clave en la replicación del BoHV-4, seguido de la activación de genes tardíos como los que codifican para importantes glicoproteínas (g) de la envoltura (gB, gH y gL). La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). Se prepararon placas de 24 wells con CEB DVB+ y CEB Control. Las células se infectaron con la cepa 07/435 de BoHV-4 a una MOI de 0,5. Luego de distintas horas post infección (p.i.) (6, 8, 12, 24, 30, 48 y 64 hs) se levantaron las células, se extrajo el ARN y se amplificaron los genes que codifican para IE2, gB, gH y gL mediante RT-PCR. Resultados: Se observó el efecto citopático (ECP) característico del BoHV-4 en las CEB Control transcurridas las 30hs p.i., mientras que para las CEB DVB+ el ECP fue evidente luego de 48hs p.i. En lo que respecta a la expresión génica se observaron pequeñas variaciones temporales en su cinética. La expresión del gen temprano IE2 no se detectó luego de 6hs p.i. en ninguno de los cultivos infectados. No se observó variación en la cinética de expresión para la gB en ambos cultivos, siendo el comienzo de la expresión a las 24 hs p.i. al igual que en células MDBK. No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general.