Candiduria recurrente en pacientes pediátricos portadores de sondas vesicales y su relación con la formación de biofilm

Abstract

La mayoría de los uropatógenos están presentes como microflora nativa o transitoria del área periuretral en la piel de los pacientes. Las levaduras del género Candida pueden producir infecciones del tracto urinario (ITU) al colonizar sondas vesicales y/o células uroepiteliales mediante la formación de biofilm, lo cual conllevaría al inicio y persistencia de la ITU. Debido a que esta propiedad le favorecería la evasión de la respuesta inmunológica y de la acción de los antifúngicos. Objetivo: La finalidad del presente estudio fue determinar la relación entre la formación de biofilm de cepas Candida y la persistencia de su aislamiento en un mismo paciente. Materiales y métodos: determinamos la formación de biofilm en cepas aisladas de 4 pacientes pediátricos que se encontraban internados en la UCI del Hospital del Niño Jesús entre el 2010 y 2013. Los aislamientos fueron realizados previamente al recambio de sonda, recuperando en 3 episodios C. tropicalis, C. albicans y C. glabrata en los pacientes A, B y C respectivamente; mientras que en el paciente D se aíslo 1 cepa de C. albicans y 2 de C. tropicalis. El intervalo de tiempo entre aislamientos fue de +/-9 días. Cabe destacar que, los pacientes fueron tratados con fluconazol desde el 1er aislamiento y todas las cepas eran sensibles a dicho antifungico ?in vitro?. La formación de biofilm se determinó por la técnica del Cristal Violeta según O?Toole y Kolter. Para ello, en placas de 96 pocillos se sembraron con 1x106 células/pocillo de cada cepa, se incubaron 2h a 37°C y luego se lavó 3 veces con H2O destilada. Luego se agregó 200 uL de caldo SAB en cada pocillo y se incubó durante 24 h a 37 °C. Finalmente, la formación de biofilm se reveló con cristal violeta 0,1% en etanol al 20% durante 1h a T° ambiente, se lavaron con agua destilada y se eluyeron con 200 uL de alcohol 96º. La densidad óptica de los eluatos se midió a 595 nm. Valores de DO mayores a los obtenidos del blanco del medio se consideraron positivos. Resultados: la determinación de la formación de biofilm arrojo un 100% de resultados positivos en las cepas testeadas. El análisis de la capacidad de formación de biofilm entre cepas aisladas de un mismo paciente y de diferentes pacientes, no arrojo resultados estadísticamente significativos. A excepción del paciente D en el cual hubo una diferencia significativa entre la DO observada entre las cepas de C. tropicalis y C albicans. Conclusiones: considerando las medidas de las DO de los biofilm podemos concluir que no existe una relación directa entre la presencia de una cepa en una ITU y su capacidad de formar biofilm. Sin embargo, la presencia del biofilm podría explicar la falla en la terapéutica con fluconazol y la persistencia de la ITU por Candida de la misma especie en los pacientes A, B y C.