Análisis genético comparativo de glutatión s- transferasa en Fasciola hepatica sensible y resistente a triclabendazole

Abstract

El trematodo Fasciola hepatica provoca una zoonosis parasitaria de impacto mundial. Ante dicha parasitosis se utiliza triclabendazole (TCBZ). La resistencia de F. hepática a TCBZ a evolucionado en todo el mundo requiriéndose ampliar los conocimientos de los mecanismos que expresan dicho fenómeno. Trabajos previos han demostrado que en una cepa TCBZ resistente (TCBZ-R) existe una mayor actividad detoxificativa por parte de la enzima Glutatión S-Transferasa (GST). En el presente trabajo se evaluó comparativamente en F. hepatica susceptible (TCBZ-S) y resistente (TCBZ-R) la expresión del ARNm para GST y la secuencia del gen respectivo (genGST). Se infestaron artificialmente dos ovinos adultos sanos con 200 metacercarias de I) cepa Cullompton (TCBZ-S), II) cepa Sligo (TCBZ-R). Cuatro meses después se capturaron las fasciolas adultas las cuales fueron procesadas para obtención de ARN total. Se diseñaron los primeros específicos y mediante RT-PCR se cuantificó mediante ImageJ ® la expresión del ARNm para GST. Posteriormente dichos amplicones fueron recuperados, purificados y ligados al vector comercial TOPO TA cloning kit (Invitrogen K457501) y secuenciados mediante servicios externos en un ABI PRISM utilizando oligonucleótidos que hibridan en el vector con el posterior análisis bioinformático. En el análisis del ARNm para GST se determinó que en la cepa resistente (Sligo) existe una expresión 1,5 veces mayor que la generada en la cepa susceptible Cullomptom. Los análisis de comparación de secuencias de nucleótidos se realizaron mediante blastx, arrojando valores de entre 91 y 100% de identidad con otras secuencias previamente identificadas de GST de Fasciola hepatica. En el análisis comparativo de la secuencia génica del gen GST de ambas cepas se detectaron al menos 2 mutaciones transversionales y 2 mutaciones transicionales en el gen GST de la cepa TCBZ-R. Estos resultados contribuyen a la comprensión de los mecanismos de resistencia a TCBZ por parte del trematodo F. hepatica.