Actividad endosterolitica del extracto proteolitico de Nep (Natrialba magadii extracellular proteasa)

Abstract

La actividad esterolítica de Natrialba magadii se determinó por el método de Silverstein´s (1974), modificado de acuerdo a las condiciones óptimas de la enzima. La actividad se estudió usando ésteres de N--carbobenzoxi-p-nitrofenil de algunos aminoácidos como sustrato. Los ensayos se realizaron a 40 ° C en 0,1 M de tampón Tris-HCl (pH 8) que contiene cys 20 mM, NaCl 1,5 M y 0,15, 0,3, y 6,25 mM de cada sustrato en la mezcla de reacción. P-nitrofenol fue seguido a 405 nm en un Cintra espectrofotómetro UV-Visible 6. Una unidad de actividad de la enzima arbitraria (Ucbz) se definió como la cantidad de proteasa que libera una mol de p-nitrofenolato por minuto en las condiciones del ensayo. Para determinar la mol de p-nitrofenol producido durante la reacción, se llevó a cabo una curva estándar con p-nitrofenol (5-50 mol) en tampón 0,1 M Tris-HCl (pH 8) que contiene 5% de acetonitrilo. Natrialba magadii fue probado contra varios ésteres de N--carbobenzoxi-p-nitrofenil diferentes de los L-aminoácidos. El sustrato preferido de Natrialba magadii era el derivado y orden decreciente dosis de Asn Gln, Gly, Lys, Tpr. Estos resultados demostraron la alta selectividad de Natrialba magadii por aminoácidos polares.