Comparación de la cinética de replicación de cepas de herpesvirus bovino 4 aisladas en Argentina, en líneas celulares de diferente origen

Abstract

El herpesvirus bovino 4 (BoHV-4) ha sido aislado de bovinos con presentaciones de diferentes cuadros clínicos y de animales aparentemente sanos en diferentes partes del mundo; se lo asocia principalmente con infecciones del tracto reproductivo en bovinos y puede infectar diferentes especies tanto in vivo como in vitro, incluyendo líneas celulares de origen humano. A partir de su primer aislamiento se consideraron dos prototipos: el americano (tipo DN599) y el europeo (tipo Movar). En Argentina, el BoHV-4 se aisló y caracterizó en el año 2007 en muestras de mucus cérvico-vaginal (MCV) de vacas que abortaron, obteniéndose hasta el momento más de 40 aislamientos. La variabilidad genómica de estos aislamientos determinó la existencia de un nuevo prototipo en Argentina (Genotipo 3). El objetivo de este trabajo fue evaluar y comparar la cinética de replicación de tres cepas de BoHV-4, filogenéticamente diferentes, in vitro en tres líneas celulares de diferente origen. Estas cepas se aislaron en el Servicio de Diagnóstico Veterinario del INTA Balcarce, de MCV de vacas abortadas. Se utilizaron cultivos celulares de origen bovino (MDBK), de simio (VERO) y de humano (HeLa) a una concentración de 5 x 104 células/ml en placas de 24 pocillos. Los cultivos se infectaron con las cepas 263, 365 y 435 a una multiplicidad de infección de 0.1, y se incubaron a 37 ᵒC con 5% de CO2. Los sobrenadantes se recolectaron a las 24, 48, 72, 96 y 120 h pos-infección (pi), realizándose la observación del efecto citopatico (ECP) y registro fotográfico de las monocapas. Los ensayos se realizaron por triplicado incluyéndose controles negativos de cada uno de los cultivos celulares utilizados. El título viral se determinó por el método de titulación a punto final sobre células MDBK y se expresó como TCID50. Los resultados se analizaron estadísticamente mediante ANOVA/Test de Tukey. Los títulos de las cepas 263 y 435 fueron significativamente mayores (p < 0,05) en los cultivos de MDBK con respecto a HeLa y VERO. La replicación de la cepa 365 fue significativamente menor (p < 0,05) en los cultivos de HeLa y no se observaron diferencias (p >0,05) en MDBK y VERO. Coincidentemente con las diferencias en la cinética de replicación, el inicio de ECP se evidenció a las 24 h solamente en la línea MDBK infectadas con las cepas 263 y 435. A las 48 h se observó ECP en todos los cultivos excepto en las monocapas de HeLa infectadas con la cepa 365. A las 72 h todas las monocapas presentaron ECP marcado, excepto la línea HeLa infectada con la cepa 365, donde el ECP fue leve. Estos resultados demuestran que la dinámica replicativa de cepas filogeneticamente divergentes pueden variar en relación a las células infectadas y aportan información sobre el comportamiento biológico de este virus, aspecto importante para el diseño de experimentos in vivo e in vitro.