Polimorfismo del promotor del gen TNF-alfa (p-TNF-alfa) bovino y su asociacion con la resistencia del huesped a la diseminacion del virus de la leucosis

Abstract

La leucosis es una enfermedad neoplasica causada por un retrovirus conocido como virus de la leucemia bovina (BLV). Esta enfermedad se encuentra en alta prevalencia en los rodeos de la Argentina provocando enormes perdidas economicas en la produccion ganadera y en la exportacion. Se ha observado un aumento en la expresion del mensajero del TNF luego de la infeccion por BLV en animales capaces de eliminar el virus en la fase aguda de la infeccion lo que sugiere el rol importante que tendria esta citoquina en la eliminacion temprana del virus. Tambien se ha demostrado que la homocigosis G/G en la posicion -824 de la region promotora del TNF-alfa estaria asociada con el desarrollo de linfosarcoma. Por otro lado, el alelo *902 del gen BoLA DRB3.2 del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II esta asociado con la resistencia a la diseminacion viral y a la baja carga proviral. El objetivo de este trabajo fue estudiar la relacion entre el polimorfismo en la region promotora del TNF-alfa y la presencia del alelo de resistencia BoLA DRB3.2*902 en animales infectados con BLV. Para el estudio se utilizaron 97 bovinos de raza Holando Argentino provenientes de tambos con antecendentes de alta prevalencia de infeccion por BLV. La identificacion de los animales infectados se realizo mediante la deteccion de anticuerpos anti-gp51 del BLV por ELISA. Los animales fueron genotipificados para determinar la presencia del alelo de resistencia *902 mediante la tecnica de PCR-SSO y PCR-RFLP. Con el fin de amplificar un fragmento de 687 pares de bases de la region promotora del gen del TNF-alfa se utilizo la tecnica de PCR con una temperatura de annealing de 60ºC. Para determinar los alelos, el fragmento amplificado fue digerido con las enzimas de restriccion Sac I y Alu I durante 90 minutos a 37ºC. Posteriormente se corrieron en gel de agarosa 1% y se visualizaron las bandas en un transiluminador de luz azul. De los 97 animales estudiados, 37 eran portadores del alelo *902 del gen BoLA DRB3.2. El 62.17% de esos animales presentaron los alelos A/A del promotor del TNF-alfa. El 37.83 % presentaron los alelos G/A, mientras que ningun animal portador del alelo *902 presento el polimorfismo G/G. Por otro lado, se estudiaron 60 animales portadores de otro alelo del gen BoLA, diferente al *902; 32 de ellos portaban alelos A/A, 18 animales alelos G/A y 10 alelos G/G. Se estimo la asociacion entre el polimorfismo en la region promotora del TNF-alfa y la presencia del alelo de resistencia BoLA DRB3.2*902 por medio del Test de Fisher y se cuantifico la misma a traves del Odds Ratio (OR). Dicho analisis fue realizado con el programa Statistical Analysis Systems, Version 9.2 (2009) (SAS, Institute Inc., Cary, NC, USA). Se demostro asociacion estadisticamente significativa (Test de Fisher, P=0.025), por lo cual, los datos obtenidos en este estudio sugieren que existiria una asociacion entre los animales portadores del alelo de resistencia *902 y el polimorfismo en la region promotora del TNF-alfa, dado que aquellos animales con el alelo *902 presentaban genotipo TNF-alfa -824 A/A homocigotas o TNF-alfa -824 A/G heterocigotas, mientras que no se encontraron animales homocigotas G/G dentro de dicho grupo. Asi, este polimorfismo a nivel de la region promotora del gen TNF-alfa en asociacion con el polimorfismo del gen de CMH clase II, podria influenciar significativamente la respuesta del hospedador frente a la infeccion con BLV, y por consiguiente al desarrollo de alta o baja carga proviral.