Relaciones genotipo-fenotipo en Hemofilia: Desarrollo de un esquema de análisis molecular para mejorar la atención médica de las familias con Hemofilia

Abstract

La Hemofilia es una enfermedad clave para estudiar la genética humana. Los objetivos del trabajo son mejorar las herramientas moleculares diagnósticas y aportar al conocimiento de la relación genotipo-fenotipo en Hemofilia A (HA). Para mejorar la determinación del defecto causal, se desarrolló y ajustó un esquema de análisis del F8 y asignación de patogenicidad, que permitió caracterizar el 96% de las familias con HA (n=911 individuos). Se reportó una familia con HA, con una deleción del promotor del F8 (Del2kb): probando severo, madre portadora, tía no-portadora, y abuelo leve (FVIII:C=35%) mostrando un mosaico genético (somático/germinal). Un abordaje qPCR alelo-específico para Del2KB, sobre sangremesodermo/saliva-ectodermo/orina-endodermo, permitió inferir la producción de FVIII en hepatocitos-endodermo (Normal%≈34%) y gónadas-epiblasto (Del2kb%≈60%) del mosaico, en coincidencia con su fenotipo. Estudios caso/control en pacientes HA-severos (n=404) permitió determinar riesgos absolutos de inhibidor distintos del promedio (18%) para los genotipos del F8: -deleciones multi-exónicas (86,9%, P=0,0006), -inversión intrón 22 (24,7%, P=0,0011) y -missense (1,2%, P<0,0001). Estudios en hermanos afectados indicaron factores predisponentes de inhibidor fuera del F8. Estudios sobre genes inmunoreguladores indicaron alto riesgo de inhibidor para la variante CTLA4:p.Thr17Ala (OR=2,11, P=0,0025). Estos hallazgos aportan a mejorar y extender la atención médica del paciente con HA y su familiaHaemophilia is a key disease to study human genetics. The objectives of the work are to improve the molecular diagnostic tools and contribute to the knowledge of the genotype-phenotype relationship in Haemophilia A (HA). To improve the determination of the causal defect, a scheme including F8-analysis and pathogenicity assignment was developed and adjusted, allowing characterization 96% of the families with HA (n=911 individuals). A family with HA and a deletion of the F8-promoter (Del2kb) was reported: a severe proband, a carrier mother, a non-carrier aunt, and a mild grandfather (FVIII:C=35%) showing a combined somatic/germinal mosaicism. An allele-specific qPCR approach for Del2KB, on bloodmesoderm/saliva-ectoderm/urine-endoderm, allowed inferring the production of FVIII in hepatocytes-endoderm (Normal%≈34%) and gonads-epiblast (Del2kb%≈60%) in the mosaic in close coincidence with his phenotype. Case-control studies in HA-severe patients (n=404) allowed determination of absolute inhibitor risks differing from the average (18%) associated with some F8-genotypes: multi-exonic deletions (86.9%, P=0.0006), -intron 22 inversion (24.7%, P=0.0011) and -missense (1.2%, P<0.0001). Studies in affected siblings showed additional inhibitor-predisposing factors. Studies on immunoregulatory genes indicated high inhibitor risks for the variant CTLA4:p.Thr17Ala (OR=2.11, P=0.0025). These findings contribute to improve and extend the medical care of the patient with HA and his family