Análisis de Genotipos de Cannabis Sativa Mediante Marcadores Microsatelitales

Abstract

En Argentina, el cultivo de Cannabis ocurre desde hace años por usuarios particulares y ONGs, lo que llevó a la existencia de una gran diversidad de genotipos locales con potencial riqueza de componentes activos. La investigación y desarrollo de genéticas locales es impulsado por el Estado Nacional a través de la sanción de la Ley de Producción de Cannabis Medicinal y Cáñamo Industrial 27.669 y las Resoluciones 140/2021 y 260/2022, que encomienda al INASE identificar, caracterizar y registrar el germoplasma nacional. En este sentido se hace indispensable la generación de herramientas tecnológicas que permitan la caracterización de genotipos a nivel molecular para establecer su identidad, trazabilidad y homogeneidad. Para ello, los microsatélites son elegidos frente a otros marcadores moleculares debido a su simplicidad y bajo requerimiento de ADN. Además, se distribuyen en todo el genoma, son co-dominantes, multialélicos, presentan alta reproducibilidad y detectan un gran nivel de polimorfismo. El objetivo de este trabajo fue analizar la diversidad genética del germoplasma de uso regional, conservado por dos grupos de investigación de la UNMdP y de la UNICEN. Nuestra hipótesis fue que los marcadores microsatélites utilizados permiten diferenciar a los genotipos de Cannabis estudiados. Para ello se amplificó por PCR la secuencia de cuatro marcadores microsatélites en 14 genotipos. Para el análisis, se comparó entre las técnicas de electroforesis en geles de agarosa al 3-4% y poliacrilamida desnaturalizante al 6% teñidos con plata. Se determinó el número de alelos por marcador y los patrones alélicos por genotipo. La poliacrilamida logró diferenciar los distintos alelos, sin embargo, se observaron bandas inespecíficas y tartamudeos. Por otro lado, la electroforesis en agarosa, más sencilla y rápida, aunque con menos resolución, fue útil para descartar productos inespecíficos. Ambas técnicas se complementaron y en conjunto, con los cuatro marcadores se pudieron diferenciar a todos los genotipos analizados.