Uso de geneticina en selección in vitro de cebolla (Allium cepa L.) para su aplicación en protocolos de transformación genética

Abstract

Buscamos obtener la concentración mínima efectiva del antibiótico geneticina en los medios de inducción de callos y de regeneración capaz de suprimir la producción de microvástagos desde callos inducidos desde embriones cigóticos (EC) de cebolla Valcatorce INTA, para usarlo como medio de selección en transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens. Los EC se cultivaron 45 días en medio de inducción de callos y 60 días en medio de regeneración. Los tratamientos consistieron en: un control sin geneticina y dosis crecientes de geneticina: 10, 20, 30 y 40 mg.L-1. Además se incluyó en un diseño factorial el agregado o no de 300 mg L-1 del antibiótico cefotaxima, que es usado para eliminar al A. tumefaciens durante la selección in vitro. La concentración creciente de geneticina inhibió paulatinamente la inducción de callos, encontrándose regeneración solo en 10 mg.L-1 (33,6%), aunque significativamente menor que en el control (56%). La cefotaxima sola no afectó la inducción (43,1%) ni la regeneración (61,1%), mientras que combinada con 10 mg L-1 de geneticina produjo significativamente menor regeneración (21,4%). El agregado de 20 mg.L-1 de geneticina al medio sería suficiente para seleccionar eventos de transformación portadores del gen de resistencia al antibiótico, ya que es la dosis menor a la cual se inhibe totalmente la regeneración in vitro de vástagos no transgénicos.