Tolerancia a antifúngicos de uso clínico en levaduras epifíticas de frutilla provenientes de cultivos tratados con fungicidas

Abstract

Diversos tipos de levaduras epifíticas procedentes de frutas han demostrado un interesante potencial de biocontrol contra patógenos postcosecha. Las frutas tratadas con estas levaduras mostraron menor deterioro y una mejor conservación de su calidad. Sin embargo, la aplicación intensiva de fungicidas sintéticos en sistemas agrícolas podría favorecer la selección de microorganismos con tolerancia a fungicidas agrícolas y a antifúngicos utilizados en medicina humana, constituyendo un potencial riesgo sanitario y una limitación para su empleo biotecnológico. En este contexto, el objetivo del presente trabajo fue aislar e identificar levaduras epifíticas provenientes de frutos de frutilla cultivados bajo manejo convencional con aplicaciones periódicas de fungicidas sistémicos a base de carbendazim y evaluar su tolerancia a antifúngicos de uso clínico como primera aproximación a la evaluación de su seguridad biológica. Se recolectaron muestras al azar de plantas de frutilla pertenecientes a parcelas con distintas condiciones de cultivo, incluyendo sectores cubiertos con plástico protector y sectores sin cobertura, en un establecimiento productivo de Lules (Tucumán, Argentina). El aislamiento inicial se realizó en placas con medio YM acidificado, suplementado con cloranfenicol y tetraciclina, seleccionándose los microorganismos con características macro y microscópicas compatibles con levaduras. Posteriormente, los aislamientos fueron sometidos a una presión de selección en placas de medio YM con concentraciones crecientes de carbendazim. Las levaduras tolerantes a carbendazim fueron luego evaluadas en placas de medio YM suplementadas con fluconazol o itraconazol, dos antifúngicos de uso clínico ampliamente utilizados. De los aislamientos de levaduras epifíticas de frutilla obtenidos, 52 levaduras crecieron en la máxima concentración de carbendazim ensayada. Entre ellas, 13 presentaron crecimiento en la mayor concentración de itraconazol evaluada y todas estas también mostraron tolerancia a fluconazol en la concentración más alta ensayada. No obstante, las colonias desarrolladas en medios con antifúngicos exhibieron una reducción del crecimiento respecto del control, especialmente en presencia de itraconazol durante los primeros días de incubación. Los aislamientos seleccionados fueron identificados molecularmente mediante la amplificación y secuenciación de la región ITS y del dominio D1/D2 del ADN ribosomal utilizando los cebadores ITS1 y NL4. Los resultados evidencian la existencia de levaduras de origen agrícola que presentan tolerancia simultánea a carbendazim y a azoles de uso clínico. Entre las levaduras identificadas se detectaron especies predominantemente asociadas a ambientes vegetales y de relevancia clínica limitada o aún poco conocida, como Apiotrichum laibachii, perteneciente a un género que incluye especies con potencial oportunista en humanos. Sin embargo, también se identificó Aureobasidium melanogenum, una levadura considerada un patógeno oportunista emergente en humanos. La coexistencia de tolerancia a carbendazim y a azoles de uso clínico en estos aislamientos plantea interrogantes sobre su potencial impacto en términos de bioseguridad. Estos hallazgos justifican la necesidad de evaluar factores de virulencia y caracterizar en mayor profundidad los perfiles de susceptibilidad antifúngica para estimar el riesgo biológico de estos aislamientos antes de considerar su uso en aplicaciones biotecnológicas.