Inmunosensor fluorescente con nanopartículas de ZnO y quitosano para el diagnóstico serológico de toxoplasmosis

Abstract

Toxoplasmosis es una zoonosis, causada por Toxoplasma gondii, un parásito protozoario de distribución global siendo una patología generalmente asintomática, y que puede causar variados problemas de salud [1, 2]. En este trabajo se describe un inmunosensor microfluídico con detección LIF para la determinación cuantitativa de anticuerpos IgG específicos anti-T-gondii. La detección serológica de estos anticuerpos juega un papel clave en el diagnóstico clínico de toxoplasmosis. Para llevar a cabo la determinación de dichos anticuerpos, se sintetizaron por vía húmeda nanopartículas de óxido de zinc (ZnO-NPS), se cubrieron con quitosano y luego se utilizaron para inmovilizar antígenos en el canal microfluídico central. Se inyectaron muestras de suero conteniendo anticuerpos IgG anti-T-gondii, los cuales reaccionaron inmunológicamente con los antígenos inmovilizados. Los anticuerpos unidos fueron cuantificados mediante la adición de anticuerpos secundarios anti-IgG marcados con fosfatasa alcalina (FAL) que en presencia de fosfato de 4-metilumbeliferilo (4-MUP) no fluorescente se convirtió en metilumbeliferona cuya fluorescencia se midió empleando una longitud de onda de excitación de 355 nm y de emisión de 440 nm. La respuesta fluorescente relativa de metilumbeliferona fue proporcional a la concentración de anti-T. Gondii IgG en el intervalo de 0 a 200 U.mL-1. El límite de detección obtenido para nuestro dispositivo fue 3,9 x10-4 U mL-1. Los coeficientes de variación fueron inferiores al 4,27% para los ensayos intra-día, e inferiores al 6,76% para los ensayos inter-día. Los resultados obtenidos por el inmunosensor con detección LIF tuvieron buena correlación con aquellos obtenidos por el método ELISA, lo que sugiere que el sensor diseñado representa una herramienta prometedora para la determinación cuantitativa de anticuerpos anti-T. gondii en muestras clínicas.