Determinación de residuos de deoxicolato de sodio en formulaciones vacunales por cromatografía electrocinética micelar

Abstract

El deoxicolato de sodio (DCNa) es el surfactante por excelencia empleado en la industria biofarmacéutica para la solubilización de vesículas de membrana externa. Es bien conocida la importancia que reviste el control de este metabolito en materiales biológicos, debido a su alta toxicidad para el organismo humano. Para demostrar la presencia de bajas concentraciones de este metabolito en formulaciones vacunales es necesario el empleo de una metodología altamente selectiva, sensible, específica y reproducible. En el presente reporte se utilizó la cromatografía electrocinética micelar (MEKC) en un analizador capilar de iones (Water corp. Milford MA), con una detección a 185 nm, con lámpara de mercurio. Se empleó un capilar de sílica fundida (Waters Corp. Milford MA); se evaluó la pureza de dos lotes de deoxicolato de sodio y se analizaron 15 muestras de vesículas purificadas, ingrediente farmacéutico activo de formulaciones vacunales. Los datos fueron registrados y procesados con el software Millennium TM (Waters Corp. Milford MA). Se determinó que los lotes de deoxicolato de sodio contenían 1,19% y 0,44% de ácido cólico contaminante y que el 93% de las muestras de vesículas purificadas tenían de 0 a 2,44 µg DCNa/100 µg de proteína. Los resultados obtenidos por MEKC fueron comparados con una modificación de una prueba cinética empleada para determinar ácidos biliares en sangre (Merckotest). El sistema MEKC mostró mejores resultados con respecto al Merkotest.

The sodium deoxycholate (DCNa) source is the surfactant used in the biopharmaceutical industry for the solubilization of outer membrane vesicles. It is well known the importance of control of this metabolite in biological materials due to its high toxicity for humans. To demonstrate significant small variations of this metabolite in vaccine formulations it is necessary to use a methodology highly selective, sensitive, specific and reproducible. In this report we used the micellar electrokinetic chromatography (MEKC) in a Capillary Ion Analyzer (Water corp. Milford MA) detection at 185 nm mercury lamp. It employed a fused silica capillary uncoated (Waters Corp. Milford MA). We assessed the purity of 2 lots of sodium deoxycholate and analyzed 15 samples of purified vesicles active pharmaceutical ingredient vaccine formulations. Data were recorded and processed with software Millennium TM (Waters Corp. Milford MA). It was found that lots of sodium deoxycholate containing 1.19 and 0.44% cholic acid and contaminate that 93% of the purified vesicles samples were from 0 to 2.44 mg protein DCNa/100 µg. MECK's results were compared with a kinetic test used to determine bile acids in blood (Merckotest). MECK system showed better results regarding the Merkotest.