Capacidad acidificante de cepas de lactobacilos vaginales y actividad antagonista frente a patógenos urogenitales

Abstract

La microbiota vaginal humana sana, caracterizada por el predominio de Lactobacillus spp., juega un rolimportante en el mantenimiento de la salud femenina. La administración, por vía vaginal u oral, delactobacilos y/o de sus metabolitos se propone como un tratamiento alternativo o complementario alos antibióticos y antimicóticos, con efectos beneficiosos sobre las infecciones genitourinariasrecurrentes. El objetivo de este trabajo fue aislar y caracterizar funcionalmente lactobacilos vaginales,para su potencial incorporación en alimentos y suplementos probióticos. Se aislaron 7 cepas a partirde muestras de exudados vaginales de mujeres sanas y se realizó la tipificación microbiológica porMALDI-TOF, identificándose dentrode las especies: Lactobacillus acidophilus / gasseri (3), L. crispatus(2) y L. jensenii (2). Para evaluar su seguridad, se determinó la actividad hemolítica de los aislamientosmediante estríasen placas de agar sangre; las 7 cepas fueron clasificadas como γ-hemolíticas, sin zonade inhibición alrededor de las colonias. Se evaluó la funcionalidad in vitro de las cepas, determinando:capacidad acidificante y actividad antagonista contra patógenos urogenitales. En relación a lacapacidad acidificante, se midió el pH del sobrenadante y la concentración(g/L) de ácidos orgánicos(láctico y acético) mediante HPLC. Los lactobacilos fueron cultivados overnight en caldo MRSc(anaerobiosis, 37°C, 22 hs) y centrifugados (4000 g, 20 min, 8°C). El pH varió entre 4,04 ± 0,02 (L.acidophilus/gasseri M7) y 4,26 ± 0,02 (L. crispatus M12a). En todos los sobrenadantes se detectó ácidoláctico y en 6 de los 7 ácido acético. Los valores de ácido láctico se encontraron entre 9,30 ± 4,67 (L.crispatus M12a) y 16,35 ± 1,34 (L. acidophilus/gasseri M16), mientras que el ácido acético varió entre4,39 ± 0,55 (L.acidophilus/gasseri M16) y 6,45 ± 1,34 (L. crispatus M12a). La actividad antagonista seevaluó frente a Escherichia coli ATCC 25922, Candida albicans ATCC 10231, C.glabrata, ATCC 90030, C.parapsilosis ATCC 2219 y C. krusei ATCC 6258. Se determinó la presencia de compuestosantimicrobianos en el sobrenadante de los lactobacilos tal cual, neutralizado y calentado (98º C, 5 min),mediante ensayo de difusión en agar. El sobrenadante tal cual de L. jensenii M15a presentó la mayorcapacidad de inhibir E. coli (11 ± 1 mm). Además, se llevó a cabo spot test, evaluando la inhibición delcrecimiento de los patógenos mencionados (7 log UFC), en presencia de cultivos overnight de loslactobacilos. La cepa más inhibitoria de E. coli fue L. crispatus M12a (30 ± 3 mm). Ninguna de las cepasmostró inhibición significativa, en ambas pruebas, sobre las 4 especies de Candida. Paralelamente, seevaluó la capacidad de inhibir la formación de hifas en C. albicans. L. acidophilus/gasseri M5 presentóla mayor capacidad inhibitoria (ratio hifas/ células = 0,68 ± 0,07). Estos resultados iniciales demuestranel potencial de los lactobacilos vaginales como alternativa en la prevención y terapia de la salud urogenital femenina. Es menester profundizar en la evaluación funcional de las cepas y complementarcon la caracterización tecnológica, en vista de su utilización a nivel industrial.