Análisis cuantitativo de las proteínas presentes en la capa germinativa del quiste hidatídico de Echinococcus granulosus

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue estudiar la composición y abundancia de proteínas presentes en las célulasde la capa germinativa, cultivadas bajo diferentes condiciones. Se aislaron las células, las cuales se cultivaronen medio condicionado producto del cultivo de hepatocitos o medio suplementado con agentes reductores yantibióticos por diferentes tiempos. Las células colectadas a diferentes tiempos se colocaron en tampón fosfatode sodio 2 mM y 2% SDS y se realizó la extracción, cuantificación y digestión de las proteínas presentes. Lospéptidos resultantes fueron analizados mediante cromatografía líquida asociada a espectrometría de masa(nano-LC-MS/MS). Se identificaron y cuantificaron un total de 975 proteínas presentes en todas las condicionesensayadas de las cuales 673 corresponden a E. granulosus y 302 al hospedador Bos taurus. A partir de lasproteínas del parásito, se realizó un análisis de ontología génica a través del cual las proteínas fueron asignadasa las categorías de proceso biológico, función molecular o componente celular. Se identificaron 101 proteínasde membrana y 78 proteínas secretadas, las cuales representan el 26,6% del total de proteínas. El análisisde enriquecimiento de vías metabólicas utilizando KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) mostróque las vías más representadas fueron glucólisis/gluconeogénesis, ciclo del citrato y metabolismo del piruvatodentro del metabolismo de los carbohidratos y la fosforilación oxidativa dentro del metabolismo energético.Se identificaron 33 proteasas y 13 proteínas involucradas en el desarrollo y la diferenciación celular, lascuales se expresaron diferencialmente en las distintas condiciones ensayadas. Se identificaron un conjunto defunciones sobrerrepresentadas relacionadas con la manipulación de las defensas y la modulación de las víasdel hospedador, el metabolismo y el desarrollo del parásito, y los procesos de diferenciación celular.