Infección productiva “in vitro” de la línea celular epitelial mamaria humana MCF10A por el virus de la leucosis bovina

Abstract

El potencial rol zoonótico del virus de la leucosis bovina (BLV) es una posibilidad que está siendo analizada con mayor frecuencia. El BLV es un retrovirus que infecta mayormente a las vacas de tambo, y que se ha descripto como un factor asociado al desarrollo de cáncer de mamas en humanos. El objetivo de este trabajo fue determinar si el BLV causa una infección productiva en células humanas de tejido epitelial mamario. Se infectó una línea celular epitelial mamaria humana (MCF10A) con linfocitos de sangre periférica de vacas infectadas. A efectos de imitar el ambiente biológico natural, la infección se llevó a cabo en presencia de estradiol. Los resultados obtenidos, luego de 25 pasajes, demostraron que las células se infectan en forma estable tanto en presencia como en ausencia de estradiol. Se detectaron fragmentos del genoma proviral integrados en el genoma celular, por la técnica de PCR convencional dirigida contra un fragmento del gen gag. Las mismas muestras se analizaron por PCR en tiempo real (qPCR), detectándose un fragmento del gen pol, observándose que, en promedio, las células infectadas en presencia de estradiol tienen el doble de número de copias integradas que las células infectadas en ausencia de la hormona. Para comprobar si el BLV causa una infección productiva en las células humanas, se infectó una línea celular epitelial mamaria de origen bovino (MAC-T) con sobrenadante proveniente de los cultivos de MCF10A. Luego de 5 pasajes se analizó el ADN genómico de esta nueva línea celular infectada, mediante la técnica de PCR convencional, comprobándose la infección de las mismas. En todos los casos se detectó la presencia de virus por la técnica de PCR, los estudios continúan para determinar la presencia de proteínas virales tanto intra como extracelulares. Estos resultados demuestran que las células MCF10A desarrollan una infección estable y productiva, liberando partículas virales al medio y contribuyen a apoyar la hipótesis de que las células humanas son plausibles de ser infectadas por el BLV, justificando la necesidad de continuar realizando estudios para determinar la potencialidad zoonótica del BLV, como factor asociado al desarrollo de cáncer de mama en humanos.