Desarrollo, optimizacion y estandarización de condiciones para ensayos de citoxicidad aguda de pesticidas organoclorados y organoforados en ciliados

Abstract

Las condiciones de crecimiento para la exposición de organismos a sustancias toxicas es determinante para la correcta interpretación de los resultados. El objetivo planteado es determinar las variables ambientales óptimas para el crecimiento de ciliados y observar la manera en que interfieren en la respuesta citotoxicológica ante pesticidas organoclorados y organofosforados. Las principales condiciones a evaluar fueron el tipo de sustrato de crecimiento, pH, salinidad, temperatura, tiempo de incubación, concentración de pesticidas y tiempo de exposición. Se emplearon cultivos mixtos de los géneros Stilonichia, Carchesium, Euplotes, Halteria, Spirostomum, Tetrahimena y Paramecium los cuales fueron incubados en recipientes de cultivo de 250 ml de capacidad a temperaturas de 20°C, 25°C, 30°C y 35°C en medio natural filtrado con adición de alfalfa y con adición de lechuga. Una vez determinado el sustrato de crecimiento, se realizaron ensayos de pH y salinidad. Los valores de pH a los que fueron sometidos los microorganismos fueron 6, 7, 8, 9 y 10, para el ajuste de pH se empleo HCl 1 y 0,1 M y NaOH 1 M. Los pesticidas empleados para los ensayos de estandarización fueron Lindano, Lambdacialotrina y Dimetoato en concentraciones de entre 0,1 y 0,5 µM. Para la determinación de viabilidad celular se realizaron tinciones citológicas empleando Rojo de Toluileno y Cloruro de Metiltionina en base acuosa, Lugol al 0,5%. Los resultados mostraron que el medio que emplea sustrato de alfalfa a temperaturas de 25ºC Y 30ºC favorece significativamente el crecimiento; a su vez el pH entre 7 y 8 es el óptimo para el crecimiento de los ciliados. En base los ensayos preliminares de exposición de determino el uso de concentraciones de 0.3 µM para Lindano y .0,1 µM para Lambdacialotrina y Dimetoato. A su vez, debido a la hipersusceptibilidad de los organismos ante los tóxicos, se seleccionaron a Euplotes y Paramecium como candidatos para los bioensayos de exposición aguda por su tolerancia intermedia.