Nueva herramienta para detectar alelos del gen ATP1A1 asociado a estrés térmico

Abstract

La provincia de Santiago del Estero posee un clima subtropical, con temperaturas que superan los 40°C, lo cual provoca estrés térmico en bovinos. La función de la bomba Na+/K+ ATPasa está directamente relacionada al estrés térmico. En bovinos Holstein existe una mutación puntual en el gen ATP1A1, que codifica la subunidad α de esta proteína, que no afecta su estructura sino que modifica su expresión. La técnica descripta hasta el momento para detectar las mutaciones es la PCR-SSCP-LIS. Esta técnica implica la corrida electroforética de los amplicones de 301pb en geles de poliacrilamida al 12% durante 12-15hs. y posterior tinción en NO3Ag. La falta de controles externos condiciona la interpretación de los resultados y genera irreproducibilidad interlaboratorio. Diseñamos una técnica, PCR-RFLP, accesible al análisis de un gran número de animales que consiste en incubar 1hs. a 50°C del amplicón con la enzima de restricción y corrida electroforética en gel de poliacrilamida 12% a 120V durante 50min. Se analizaron muestras de animales Holando-Argentino con diferentes genotipos. Todas las muestras se estudiaron con las técnicas de PCR-SSCP-LIS y PCR-RFLP. Los resultados se confirmaron por secuenciación. Los patrones observados por PCR-RFLP para los diferentes genotipos son dos fragmentos de 160 y 141pb para CC, una banda de 301pb para AA y 3 bandas: 301, 160 y 141pb para CA .Estos resultados nos demuestran que la PCR-RFLP es un método confiable para detectar el polimorfismo del exón 17 del gen ATP1A1. La ventaja de esta herramienta alternativa es su practicidad, eficiencia y reproducibilidad.