Efecto de la temperatura de conservación sobre la expresión de proteínas en granos de polen de Chenopodium album L.

Abstract

Los componentes activos del polen a partir del cual se obtienen los extractos alergénicos pueden variar considerablemente de acuerdo al momento, el lugar dónde se recolecta y el período comprendido entre la recolección y su utilización. El presente trabajo pretende evaluar si la temperatura de conservación del grano de polen influye en la expresión de proteínas y en la antigenicidad de las mismas, al momento de preparar un extracto alergénico. La especie elegida para estudio fue Chenopodium album L. ya que es de gran interés alergológico en la ciudad de Bahía Blanca. Los granos de polen se conservaron a temperatura ambiente, 4 °C y -18 °C por el término de dos meses. El contenido proteico de los extractos se determinó por el Método de Bradford. La expresión proteica y la antigenicidad se estudiaron mediante electroforesis vertical Tricina-PAGE-SDS 12, 5 % e Inmunoblot respectivamente. Los resultados obtenidos demuestran que la concentración proteica total fue menor para los extractos obtenidos del polen conservado a temperatura ambiente que para las otras dos condiciones. La expresión de proteínas varía cuantitativamente en todos los extractos y si bien la expresión cualitativa prácticamente se conserva, aparece para el polen conservado a temperatura ambiente, una banda de PM menor a 12 kDa. Esta banda podría ser consecuencia de la degradación proteica que experimenta el polen a esa temperatura de almacenamiento. En cuanto a la antigenicidad de los extractos no hay diferencias cualitativas aunque pueden apreciarse diferencias cuantitativas significativas. Concluimos que la conservación del polen a 4°C o a -18°C serían las más adecuadas, ya que permiten obtener una mayor concentración proteica partiendo de la misma masa de polen.

The active components from which pollen allergen extracts are obtained can change considerably according to the time or the place where collect and the time period between harvesting and use. This work aims to assess if the storage temperature of the pollen grain influences protein expression and its antigenicity when preparing an allergen extract. The species chosen for our study was Chenopodium album L, since it is of great allergologic interest in the city of Bahía Blanca. Pollen grains were stored at room temperature 4ºC and -18ºC , for a period of two months. The protein content of the extracts was determined by the Bradford method. Protein expression and antigenicity were studied by vertical electrophoresis Tricine SDS-PAGE 12, 5% and Immunoblot. The obtained results show that the total protein concentration was lower in the extracts of pollen stored at room temperature than in those under two conditions. Protein expression differs quantitatively in all extracts and even if the qualitative expression is kept practically the same, in the Tricine SDS-PAGE gel and the pollen stored at room temperature there appear a band of MW inferior to 12 kDa. This band could result from the protein degradation experienced by pollen stored at that temperature. As regards extract antigenicity, there are no qualitative differences even though there are significant quantitative differences. We conclude that pollen preservation at 4ºC or -18ºC would be the most appropriate since it allows greater protein concentration for the same mass of pollen.