Evaluación de la PCR en tiempo real dúplex (qPCR) con sondas TaqMan para la detección de la infección por Trypanosoma cruzi en muestras de sangre periférica congeladas anticoaguladas con EDTA

Abstract

La qPCR multiplex para detectar la infección por Trypanosoma cruzi, agente causal de la Enfermedad de Chagas (ECh), ha sido validada y estandarizada en estudios multicéntricos para el monitoreo del tratamiento anti-parasitario a partir de 5 o 10 mL de sangre periférica mezclada con un volumen igual de clorhidrato de guanidina 6 M / EDTA 0.2 M pH: 8.0. El objetivo de este trabajo fue realizar una validación analítica del método de qPCR a partir de muestras de sangre congeladas utilizando EDTA como anticoagulante (sangre-EDTA). El rango anticipado reportable y el límite de detección (LOD95) se estimaron utilizando sangre-EDTA no infectada inoculada con epimastigotes de la cepa CL-Brener (TcVI) en concentraciones de 0,1, 0,5 y 1 equivalentes parasitarios por mililitro (p.e/mL). Los datos fueron analizados por el criterio de Tukey para detectar valores atípicos del control de amplificación interno; el LOD se calculó con el software Probit MedCalc, obteniendo un valor de 0,27 (IC 95% [0,16-1,26]) p.e/mL. El método se utilizó en un muestreo de conveniencia para monitorear una serie de casos con ECh en distintas situaciones clínicas: 5 casos de reactivación de la infección en pacientes con ECh Crónica que recibieron un trasplante de órgano, 2 pacientes seronegativos que desarrollaron ECh Aguda luego de recibir un trasplante de órganos sólidos de donantes con ECh y un paciente con ECh y artritis reumatoidea bajo tratamiento inmunomodulador. En todos los casos, la qPCR con muestras de sangre-EDTA fue útil para monitorear y tomar decisiones sobre el tratamiento de los pacientes, ya sea con drogas anti-parasitarias o inmunomoduladoras, pudiendo incluso detectar la presencia de parásitos cuando el Strout aún permanecía negativo. La relevancia de analizar la infección por T. cruzi en muestras de sangre-EDTA radica en su disponibilidad comercial en diversos formatos y su uso actual en las instituciones de salud.