Estudio de la expresión en los transcriptos que codifican para las proteínas antigénicas de Herpesvirus bovino tipo 4 (BoH-V4)

Abstract

Los gammaherpesvirus son patógenos importantes en humanos y animales. Durante los primeros eventos de infección estos virus manipulan las vías de señalización de las células hospedadoras para permitir una infección exitosa. En las células infectadas por BoHV-4, el IE2 (Immediate Early Gene) es el primer gen que se transcribe y se lo considera un factor clave para determinar el resultado de la infección por BoHV-4. Las diferentes proteínas que componen las partículas virales tienen funciones críticas no solo en la estructura viral y en la entrada a la célula diana, sino también en la evasión de la respuesta antiviral del huésped. En el BoHV4 se encuentran la glicoproteína B (gB), gH, gM, gL y gp80, siendo gB, gH y gp80 las más glicosiladas. La glicosilación de las proteínas de la envoltura podría estar involucrada en la protección del virión a la neutralización por anticuerpos, debido a la formación de una especie de escudo de glicanos para epítopes blancos del virus. Por otro lado, la glicoproteína gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y se encuentra formando un heterodímero con gH, mientras que la gB es responsable de la adhesión a la célula huésped e indispensable para la replicación lítica del BoHV-4. El objetivo de este trabajo fue estudiar la expresión de los transcriptos que codifican las glicoproteínas de la envoltura de dos cepas de campo de BoHV-4 para determinar si la variabilidad en su capacidad seroneutralizante puede atribuirse a diferencias en la expresión de estos genes. Se seleccionaron las cepas 07/435 y 10/154, genéticamente divergentes, las cuales fueron evaluadas previamente en un estudio in vivo donde, luego de su inoculación experimental en terneros, se detectaron anticuerpos neutralizantes sólo en los infectados con la cepa 07/435, sin observarse reacción cruzada con la cepa 10/154. Las cepas de BoHV-4 se propagaron en células MDBK, se extrajo el ARN a diferentes horas post-infeccion (p.i.) y se amplificaron ambos genes mediante RT-PCR.Se observaron diferencias entre las cepas en la expresión de los genes analizados. El gen IE2 se detectó a las 4, 8 y 10 hs pi en las células infectadas con la cepa 10/154, mientras que en las infectadas con la 07/435 el transcripto se detectó a partir de las 6 hasta las 24 hs pi.Tanto los transcriptos para las glicoproteínas gp80, gL, gH y gM se detectaron a partir de las 2hs p.i. en la células infectadas con 10/154, mientras que en las infectadas con la 07/435 la expresión comenzó luego de 24hs p.i., excepto el gH que se expresó a partir de 10hs p.i. El gB se expresó luego de 10hs en las células infectadas con 10/154 mientras que con 07/435 luego de 24hs.Los resultados de este estudio demostraron que las cepas de BoHV-4 genéticamente divergentes presentan variaciones en la expresión temporal de los genes que codifican las glicoproteínas de la envoltura del BoHV-4 asociadas a la inducción de anticuerpos neutralizantes, lo cual podría estar asociado a una variación en la respuesta inmune humoral inducida por las distintas cepas en el huésped.