Estudio de degradación de glutatión peroxidasa en órganos de rata post mortem mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC- UV)

Abstract

La glutatión peroxidasa (GPx), es una selenoenzima presente en los mamíferos que desempeña una función antioxidante clave al proteger las células del estrés oxidativo inducido por las especies reactivas del oxígeno (ROS). El estrés oxidativo se define como un desequilibrio entre la producción de ROS y la capacidad del sistema antioxidante endógeno para neutralizarlas, lo cual puede provocar alteraciones en el ADN, lípidos y proteínas. Este desequilibrio se presenta comúnmente en órganos destinados al trasplante durante la isquemia y la falta de perfusión post mortem, comprometiendo la viabilidad del injerto. El objetivo de este estudio fue evaluar si la administración oral de Seleno-Metionina (SeMet) en ratas previene la proteólisis post mortem, en hígados, riñones y corazón, mediante el análisis de proteínas totales y productos de proteólisis (PPs). Se administró una dosis diaria de 80 µg/kg/día de SeMet a ratas Wistar durante 7 días. Al final de la administración, se sacrificaron las ratas y se recogieron muestras de hígado, corazón y riñón a diferentes intervalos post mortem (PMI). Se determinó el contenido de proteínas totales en órganos a 0 y 6 horas post mortem (PMI) mediante el método de Bradford. Además, se utilizó cromatografía de exclusión por tamaño (SEC-UV) previa filtración de 10 kDa para aislar las proteínas y PPs, evaluando sus perfiles cromatográficos. Los resultados evidenciaron que, en el hígado, la administración de SeMet indujo un aumento significativo en la concentración de proteínas totales a un PMI de 0 (p = 0,004), seguido de una disminución a PMI 6, posiblemente asociada a procesos autolíticos. Esta tendencia fue consistente con una menor intensidad de los picos de PPs, en comparación con el grupo control. En los riñones, si bien la concentración proteica inicial fue inferior en el grupo tratado (p = 0,0001), esta se mantuvo estable a lo largo del tiempo (p = 0,068), en contraste con la disminución significativa observada en los controles (p = 0,0001); adicionalmente, los niveles de PPs fueron más bajos, lo que sugiere una menor proteólisis. Por último, en el corazón, aunque no se detectan diferencias significativas en los PPs a PMI 0, se observa una conservación relativa de proteínas a PMI 6 en el grupo tratado, lo que sugiere un efecto protector del SeMet frente a la degradación post mortem. En conjunto, estos hallazgos respaldan la hipótesis de que la administración oral de SeMet modula favorablemente el estado redox de los órganos post mortem, disminuyendo la proteólisis y en consecuencia, aumentando el potencial de preservación tisular para trasplante. Además, la información obtenida en este estudio resulta relevante para mejorar la supervivencia del injerto mediante la administración de SeMet a donantes vivos, dada la función antioxidante y protectora de GPx1 frente a la lesión tisular inducida por isquemia-reperfusión (IRI).