Determinación de apoptosis por TUNEL e inmunoreactividad de las proteínas BCL-2 y BAX durante la placentación porcina: Comunicación

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue estudiar en muestras placentarias porcinas de diferentes estadios gestacionales, la fragmentación del ADN a través de la técnica de TUNEL y la inmunoreactividad de las proteínas reguladoras BAX y BCL-2, a fin de detectar los mecanismos pro y antiapoptóticos de la vía mitocondrial involucrados en la remodelación celular placentaria. Se utilizaron cortes histológicos de ± 4 :m provenientes de placentas porcinas de ± 30, 55, 70 y 114 días de preñez. Para la detección de las proteínas BAX y BCL-2 se realizó la técnica de inmunoperoxidasa utilizando anticuerpos comerciales específicos y para la detección de la fragmentación de ADN se utilizó la técnica de TUNEL. Los resultados se expresaron en forma semicuantitativa y para cada período gestacional se determinó la distribución de la intensidad de inmunomarcación a través del valor de High Score (HS). En placentas de 30 días de preñez se observaron núcleos apoptóticos característicos distribuidos en forma de parches en el epitelio materno, mientras que la marcación se presentó en forma lineal en los demás períodos placentarios. En los diferentes períodos gestacionales la proteína proapoptótica BAX se encuentra regulada por la expresión del marcador antiapoptótico BCL-2. Al inicio de la gestación se detectaron valores de HS positivos con el marcador apoptótico BAX, los mismos aumentaron hacia los días 55 y 114 de preñez y disminuyeron hacia el día 70 de gestación. En conclusión, al inicio de la gestación porcina la remodelación placentaria observada acontece por inducción de la vía intrínseca a través de BAX, siendo mayor hacia los 55 y 114 días de preñez.

The aim of the present work was to determine fragmentation of the DNA with TUNEL and the presence of the mitochondrial regulating protein BAX and BCL-2 in porcine placenta during gestation, to detect the mechanisms pro and antiapoptotic involved of the mitochondrial way during the placental remodeling. Histological slides of ±4 :m of porcine placenta of ± 30, 55, 70 and 114 days of gestation were used. For the detection of the BAX and BCL-2 immunoperoxidase technique and commercial antibodies and for the TUNEL technique the ApopTag® equipment were used. The results were expressed semiquantitative form and for every gestational period the distribution of the immunolabeling intensity was determined by means of the High Score value (HS). At the 30 days nuclei with cromatinic margination was identified by TUNEL. At the 30 days of pregnancy the labeling is in patches forms while in linear form at the 55, 70 and 114 days of pregnancy. BAX expression is regulated by the expression of the BCL-2. To the beginning of the gestation BAX HS values positive was detected, these values increased about the 55 and 114 days of pregnancy and decreased the day 70 of gestation. In conclusion, in pigs to beginning of the gestation the placental remodeling for apoptosis across the intrinsic way BAX, but the biggest placental remodeling to the 55 and to 114 days of pregnancy was observed.