Actividad de Anhidrasa carbónica branquial y niveles de bicarbonato en hemolinfa del camarón Palaemon argentinus (CRUSTACEA: DECAPODA) luego de una transferencia abrupta a salinidades concentradas

Abstract

El camarón “dulceacuícola” Palaemon (=Palaemonetes) argentinus vive y se reproduce en agua dulce, pero también en salinidades cercanas a la del agua de mar, por lo tanto, representa un buen modelo para estudiar los mecanismos subyacentes que permiten tolerancia a alta salinidad, mecanismos desconocidos aún para la mayoría de los taxa acuáticos. Previamente observamos el efecto de la transferencia a salinidades concentradas en la actividad NKA, aunque se desconoce el posible rol de otras enzimas clave, como la anhidrasa carbónica (AC), en mecanismos osmoionorregulatorios. El objetivo del trabajo fue evaluarla actividad deACen branquias aisladas y concentración de bicarbonato en hemolinfa de adultos del camarón P. argentinus en agua dulce (1‰, T0: control) y transferidos abruptamente a salinidades concentradas (15 y 25‰) durante un plazo corto (6h); mediano (48h) y largo (>3 semanas). La actividad de AC se determinó colorimétricamente como actividad pNPacetilasa inhibible por acetazolamida (buffer 0,1M Hepes-Tris pH 7,4; 1mMpNPA; ±2,5µM acetazolamida) en sobrenadante (10000xg 30 seg) de homogenato de pool de branquias (0,25 M Sacarosa/EGTA-Tris 0,5 mM, pH 7,4).La concentración de bicarbonato se midió colorimétricamente (kit comercial de CO2; Wiener Lab AA)en agua (A) y hemolinfa (Hl).La Hl se extrajo mediante punción del pericardio con jeringa. Se poolearon muestras de los tejidos de 3-6 camarones por réplica. Las diferencias estadísticasentre los tiempos de exposición se evaluaron con ANOVAs de una vía (n=5-8; p<0,05) y el test Holm-Sidak para las comparaciones a posteriori vs T0;mientras que entre la hemolinfa y su correspondiente medio se realizó con t-test (n=3-4; p<0,05). AC disminuyó alrededor del 50% luego de 48h de exposición a 15‰ con respecto al control 1‰ (T0: 45,5±13nmolpNP min-1 mg prot-1), mientras que los niveles de actividad a corto y largo plazo fueron similares al control. La transferencia a 25‰no afectó la AC.A T0, la concentración de bicarbonato fue mayor que la del medio externo (Hl:12,2±0,9; A: 2,5±0,2mmol/L); disminuyendo luego de 6h de la transferencia a 15‰ (5,6±0,4 mmol/L), mientras que a las 48h y largo plazo se reestablecieron los valores de T0, siendo, a su vez similares a los del medio. Durante la transferencia a 25‰, el bicarbonato fue constante en Hl, siendo similar tanto a Hl T0 como al correspondiente medio externo a 25‰. Los resultados indican que P. argentinus es capaz de hiperregular iones bicarbonato en agua dulce. La variaciónen la actividad de AC en branquias a mediano plazo indica que esta enzima está involucrada en los procesos osmoionorregulatorios y sugieren una respuesta diferencial según el grado de estrés salino.