Diseño y estandarización de la técnica de PCR para porphyromona gingivalis

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue diseñar y estandarizar la técnica de PCR para detección en líquido gingival de Porphyromonas gingivalis, en pacientes con enfermedad periodontal. Material y métodos: Se utilizaron iniciadores específicos para el gen ARNr 16s de Porphyromonas gingivalis. La especificidad de los iniciadores se ensayó utilizando material genético extraído de la cepa de referencia Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Se ajustaron las condiciones de amplificación y concentraciones de la mezcla de reacción. Para validar la técnica se aplicó a diez muestras clínicas de líquido gingival de pacientes con enfermedad periodontal. Resultados: Se vizualizaron bandas nítidas a 197pb utilizando cebadores específicos en seis muestras clínicas, y se obtuvo sensibilidad hasta 15 ug/ml de ADN purificado de la cepa de referencia ATCC 33277.Conclusiones: Se validó y estandarizó una PCR sencilla para la detección de Porphyromonas gingivalis en líquido gingival

The aim of the present work was to design and standardize the PCR technique for the detection of Porphyromonas gingivalis in gingival fluid in patients with periodontal disease. Material and methods: Specific primers were used for the Porphyromonas gingivalis 16s rRNA gene. The specificity of the primers was assayed using genetic material extracted from the reference strain Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. The amplification conditions and concentrations of the reaction mixture were adjusted. To validate the technique was applied to 10 clinical samples of gingival fluid of patients with periodontal disease. Results: Clear bands were visualized at 197bp using specific primers in 6 clinical samples, and sensitivity was obtained sensitivity up to 15ug / ml purified DNA from the reference strain ATCC 33277. Conclusions: A single PCR was validated and standardized for the detection of Porphyromonas Gingivalis in gingival fluid