Efecto del glicerol en la viabilidad de Saccharomyces eubayanus, una levadura patagónica con potencial biotecnológico

Abstract

Introducción y objetivos. La criopreservación es un método de conservación ex situ donde múltiples factores como la fase de crecimiento para cosechar la biomasa sometida al proceso de congelacióny tipo de crioprotectante afectan la viabilidad de levaduras. El glicerol es un crioprotectante ampliamente usado, sin embargo se desconoce su efecto sobreSaccharomyces eubayanus, una levadura relevante para la biotecnología. Trabajos en la literatura científica indican que levaduras en fase estacionaria presentan mayor viabilidad al ser sometidas a procesos de criopreservación (Cabrera et al., 2020), es por ello que resulta importante conocer la curva de crecimiento de S. eubayanus. Los objetivos de este trabajo fueron a) caracterizar la cinética de crecimiento deS. eubayanusy el tamaño de las células en cada fase, b) determinar el modelo de crecimiento (Weibull, Gompertz, Logistic y Richards) que mejor ajusta con datos experimentales y sus coeficientes, y c) determinar el efecto de concentración y tiempo de exposición de glicerol en la viabilidad.Materiales y métodos. S.eubayanusCRUB1568Tseincubó a 20°C enmedio YM (en un agitador orbital a 180 rpm). Se midió el crecimiento en el tiempo por espectrofotometría a 600 nm y recuento celular en cámara de Neubauer. Se modelaron los datos obtenidos mediante regresiones no lineales. El área y el diámetro de las células en cada fase se midieron en ImageJ.Alícuotas del cultivo se centrifugaron resuspendiendo en glicerol 10% p/p y20% p/p a distintos tiempos. La viabilidad se midió mediante recuento en placa (UFC/mL) con tres réplicas y dos pseudoréplicas, utilizando como control células en agua destilada. Los datos se compararon aplicando ANOVA (test de Tuckey, alfa=0,05). Resultados. El modelo de Weibull presentó el mejor ajuste a la cinética de crecimiento, R2adj=0.98, ver Figura. El tamaño celular en las distintas fases no difirió significativamente (p>0,05), siendo el diámetro promedio en la fase exponencial 4,73 μm y su desviación estándar 0,74 μm.Se observó un efecto negativo sobre la viabilidad a mayor concentración de glicerol luego de 15 minutos de exposición (p<0,05). No se observó un descenso en el % de viabilidad asociado al tiempo de exposición para ambas concentraciones de glicerol (ver Tabla).Contrario al comportamiento de S. eubayanus, cabe señalar que para la levaduraS. cerevisiae CBS1171Tla viabilidad es mayor al 97% para concentraciones de glicerol superiores a 70%p/p (Dumont et al., 2002).Conclusiones. Se obtuvo la cinética de crecimiento de la levadura autóctona S. eubayanus, se determinó su tamaño en distintas fases de crecimiento y se evidenció que la exposición al glicerol en concentraciones habituales para criopreservación puede tener un efecto negativo en levaduras no convencionales.