Desarrollo de diversas estrategias de extracción en fase sólida para la minimización del efecto de matriz de orina humana sobre la respuesta de carnitina

Abstract

Carnitina es un metabolito endógeno presente en mamíferos. Su función principal es la detransportar ácidos grasos de cadena larga hacia el interior de la mitocondria para la producción de energía celular. El metabolismo de carnitina se encuentra íntimamente ligado a una gran variedad de trastornos metabólicos [1]. El monitoreo de sus niveles en fluidos biológicos constituye una herramienta poderosa para estudios de diagnóstico clínico. Sin embargo, debido a la complejidad de la matriz de las muestras biológicas, la cuantificación precisa y confiable de carnitina representa una tarea difícil. En consecuencia, la limpieza de las muestras y compensación del efecto de matriz es de gran importancia durante las etapas de análisis de separación/ionización por espectrometría de masas.Estudios preliminares permitieron cuantificar el efecto de supresión de señal causado por lacomposición de las muestras sobre la señal de carnitina, obteniéndose como resultado un efecto de matriz de ~50 % para las muestras de orina humana [2]. Como consecuencia de ello, en el presente trabajo se desarrolló una metodología de limpieza para muestras de orina que implicó el uso de cartuchos de extracción en fase sólida (SPE). De este modo, se emplearon sorbentes diversos, entre ellos, de intercambio catiónico débil (CBA) y ácidos-básicos-neutros (ABN). Luego de la optimización de las diversas etapas de SPE, los cartuchos demostraron un funcionamiento satisfactorio para la retención de los interferentes presentes en las muestras de orina, con recuperaciones de aproximadamente 90% de carnitina y, consecuente, minimización del efecto de matriz observado. La determinación sensible, robusta y precisa de carnitina, en el orden de ultratrazas (μg L-1), en muestras de orina humana se realizó mediante cromatografía líquida de ultra elevada resolución asociada a espectrometría de masas en tándem. El método propuesto permitió la cuantificación confiable de carnitina en muestras biológicas de interés clínico.