Puesta a punto de una metodología de extracción de proteínas a partir de una harina de cotiledones de Prosopis nigra y evaluación del poder antioxidante de las mismas

Abstract

Introducción: El género Prosopis presenta alrededor de 45 especies distribuidas en zonas tropicales y subtropicales de América, África y el sudoeste de Asia. Es un género abundante en el Noroeste de Argentina. Dentro de este género se destacan las especies de P. alba y P. nigra. Estas especies son usadas como fuente de madera, carbón, leña y materiales de construcción, también en apicultura, medicina tradicional y como comestible. Según el código alimentario argentino se entiende por harina de algarrobo al producto de la molienda de los frutos completos. Sin embargo en el proceso de obtención de la harina por métodos artesanales las semillas son descartadas perdiéndose en consecuencia el valor proteico de las mismas. Muchas proteínas y péptidos presentan propiedades biológicas convirtiendo así a los alimentos que las contienen en alimentos funcionales. El objetivo de este trabajo es desarrollar un protocolo de extracción de proteínas a partir de cotiledones de frutos de P.nigra, y evaluar su potencial funcionalidad (capacidad antioxidante). Materiales y Métodos: Para facilitar la obtención de los cotiledones se aplicó uno de los siguientes tratamientos de escarificación de las semillas de P. nigra,método 1 con NaOH 0,5% y método 2 con H2SO4 conc. Para cada tratamiento se extrajeron los cotiledones, se molieron hasta obtener harina y se realizaron extracciones sucesivas con buffer fosfato de sodio 50 mM, pH=7,3 conteniendo NaCl 2M (Etapa 1) y luego se efectuaron tres extracciones sucesivas con NaOH 0,5% (Etapa 2, 3 y 4). Posteriormente se realizó una precipitación de las proteínas en medio ácido. En cada etapa del proceso se determinó el contenido de proteínas y azúcares totales por técnicas espectrofotométricas, y se realizaron electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE). La actividad antioxidante se determinó frente al radical catión ABTS. Resultados: Ambos procesos de escarificación arrojaron resultados semejantes en cuanto al rendimiento en peso de harina de cotiledones (4,64% y 4,24%, métodos 1 y 2, respectivamente), niveles de proteínas y de carbohidratos, en las diferentes etapas del proceso de obtención del extracto proteico. El rendimiento de proteínas a partir de harina de cotiledón fue de 16,5 y 17,4 % para los métodos 1 y 2, respectivamente. En cuanto al rendimiento en azúcares totales, los valores obtenidos fueron de 5,3 y 6,3%. Los extractos proteicos obtenidos por ambos tratamientos de escarificación presentaron perfiles de bandas similares en la SDS-PAGE. Todos los extractos obtenidos presentaron capacidad antioxidante. No se observaron diferencias significativas entre ambos métodos de extracción. Los valores de CD50 de radicales ABTS estuvieron comprendidos entre 23µg/ml y 45µg/ml para las diferentes etapas de extracción. En consecuencia se reunieron las extracciones realizadas con NaOH 0,5%, (Etapas 2, 3 y 4) y se mantuvieron las extracciones con buffer (Etapa 1) por separado para cada tratamiento. A estas muestras se le realizó una precipitación ácida, obteniéndose una fracción enriquecida con proteínas de bajo peso molecular, menor a 20kDa, la que presentó mayor capacidad depuradora de radicales libres. Conclusiones: Tratamientos de escarificación diferentes no modifican el patrón de proteínas de los extractos provenientes de harina de cotiledón de semillas de P. nigra. La metodología utilizada para la extracción de proteínas permitió obtener un extracto proteico enriquecido en proteínas de bajo tamaño molecular con capacidad antioxidante.