Optimización de un protocolo de micropropagación de cannabis sativa (Quimiotipo III) para preservar su perfil de cannabinoides

Abstract

En este trabajo se optimizaron las condiciones para la micropropagación de la variedad Charlie´s Dream, de quimiotipo III (THC<<CBD) perteneciente a la especie C. sativa, a partir de yemas axilares bajo la hipótesis de que la propagación clonal preserva las características de los quimiotipos manteniendo los niveles de CBD y Δ9-THC entre las plantas madre y las plantas micropropagadas. Se analizó la infuencia de las citoquininas bencilaminopurina (BAP) y tidiazurón (TDZ), en diferentes concentraciones (0,5; 1 y 2,5 μM), y en dos tipos de medio Murashige y Skoog con concentraciones vitamínicas diferentes (medios MS y MSS). Se evaluó el progreso en el crecimiento de las yemas axilares analizando longitud, cantidad de brotes generados y área vegetal total. Se evaluó también el rol de los ácidos naftalenacético (ANA) e indolbutírico (IBA) en el proceso de enraizamiento tanto in vitro como ex vitro. A partir de fores secas, se obtuvieron las resinas de las plantas madre y las plantas micropropagadas por extracción con etanol frío, y se analizó el contenido de CBD y Δ9-THC por GC/MS. Los resultados muestran que el medio MSS no mejoró ninguno de los parámetros de crecimiento evaluados con respecto al medio MS. En cambio, sí se observaron diferencias signifcativas entre el uso de las hormonas TDZ y BAP. A los 15 días post-iniciación de la micropropagación (dpim) a partir de las yemas axilares, los explantos crecidos en presencia de TDZ 0,5 y 1 μM mostraron un mayor número de brotes y área foliar respecto a los explantos cultivados en presencia de BAP en cualquiera de las tres concentraciones ensayadas. Sin embargo, a los 30 dpim los explantos crecidos en presencia de BAP mejoraron su rendimiento, alcanzando valores similares en número de brotes y área foliar a los observados para TDZ. Cabe mencionar que no se observaron diferencias en la longitud de los explantos en todas las concentraciones analizadas para ambas hormonas. Asimismo, los explantos crecidos en TDZ 2,5 μM mostraron una mayor producción de callos y vitrifcación. Por otro lado, el proceso de enraizamiento in vitro no logró alcanzar el desarrollo de raíces. Por el contrario, el enraizamiento directo en suelo se logró sin difcultad, observándose una mayor longitud de raíces cuando los brotes se trataron previamente con IBA 2,5 μM. Finalmente, la relación CBD/Δ9-THC se mantuvo dentro de valores similares para las plantas madre y las micropropagadas. Por lo tanto, es posible desarrollar protocolos estandarizados para la micropropagación de la variedad Charlie’s Dream, donde las concentraciones y tipos de hormonas juegan un papel clave. Asimismo, se puede concluir que la micropropagación es una técnica segura que permite la conservación de la relación CBD/THC entre las plantas micropropagadas entre sí y con respecto a la planta madre.