Optimización de un método espectrofluorimétrico in vivo para la detección simultánea de fucoxantina, clorofila a y lípidos neutros en biorrefinerías de Halamphora coffeaeformis

Abstract

Algunas especies de diatomeas marinas presentan un gran interés en el campo de la nutracéutica y cosmética debido a su capacidad de producir altas concentraciones de fucoxantina (Fx) y de lípidos neutros, ricos en ácido palmitoleico (C16:1 ω-7) y ácido eicosapentaenoico (C20:5 ω-3; EPA). El desarrollo de métodos de detección rápida e in vivo de estos metabolitos resulta de gran relevancia al momento de analizar su producción. En este contexto, el objetivo del presente trabajo plantea la optimización de un nuevo método espectrofluorimétrico para detectar en forma simultánea Fx, clorofila a (Cl a) y Rojo Nilo (RN), en cultivos de la diatomea marina Halamphora coffeaeformis. Las condiciones de incubación de los cultivos durante 10 días fueron: medio f/2 a 20°C, 100 µE.m-2.s-1 y 12h:12h de luz:oscuridad. Con el fin de determinar la longitud de onda de excitación óptima (λex) de cada pigmento, correspondiente a su emisión de luz máxima (λem), inicialmente se analizaron los espectros de absorción del extracto de pigmentos de H. coffeaeformis (0.05% m/v), considerando las absorbancias de los estándares de Fx y Cl a, así como valores de referencias bibliográficas. Los valores máximos de λem de la Fx y Cl a fueron obtenidos a 718,5 nm y 680 nm, respectivamente. Asimismo, el espectro de emisión del RN, fluorocromo específico para lípidos neutros, mostró un λem máximo de 571 nm. Las muestras fueron medidas en cada fase de crecimiento utilizando un espectrofluorímetro Jasco FP-8250. En cada muestra se midió in vivo la señal correspondiente a los pigmentos y luego de 5 minutos de incubación con RN. La IF-Cl a presentó un valor máximo de señal (unidades arbitrarias) durante la fase exponencial, mientras que los valores máximos de IF-Fx e IF-RN se observaron en la fase estacionaria. De acuerdo con los resultados obtenidos, el presente método espectrofluorimétrico representa una herramienta de detección rápida y efectiva para evaluar en forma simultánea la cinética de estos metabolitos en biorrefinerías de H. coffeaeformis.