Comparison of two methods for the detection of Potato virus Y in potato seed

Abstract

Potato virus Y (PVY) es el virus de mayor incidencia en el cultivo de papa (Solanum tuberosum) en el Sudeste de la provincia de Buenos Aires y representa una limitante para la producción de papasemilla en Argentina. Es transmitido por los áfidos y los tubérculos semilla, lo que genera acumulación del virus y ocasiona una disminución en el rendimiento del cultivo. El objetivo de este trabajo fue comparar dos métodos de detección de PVY en tubérculos de papa semilla, DAS-ELISA, el método tradicional para la detección de esta virosis en la legislación argentina y el de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa con transcriptasa inversa (RT-qPCR), como una alternativa más rápida. Se tomaron muestras del tejido apical de 42 tubérculos para la RT-qPCR. La extracción de ARN se realizó con Trizol y la retrotranscripción se efectuó con enzima MMLV de Invitrogen y la amplificación con el cebadores que amplificaron un producto de 182 pb del genoma de PVY de Agindotan et al. (2007). Posteriormente los tubérculos se trataron con Rindite, para estimular la brotación y al cabo de 21 días se tomó la muestra del tejido vascular de la sección apical para la detección del virus por DAS-ELISA. Se utilizaron antisueros de PVY policlonales y se siguió el protocolo descrito por el proveedor de los antisueros (Bioreba). El 64.3% (27 de 42) de los tubérculos resultaron positivo para PVY por RT-qPCR, y el 54.7% (23 de 42) con DAS-ELISA. La prueba de RT-qPCR presentó una sensibilidad de 78.3% y una especificidad de 52.6% si se toma como gold standard al DAS-ELISA. El método de RT-qPCR insume menos tiempo, además, tiene una alta sensibilidad, por lo que incluso los tubérculos inactivos recién cosechados pueden analizarse. Esto representa una ventaja en los casos en que los tubérculos sean exportados a otro hemisferio o se requiera definir su utilización como papa semilla con urgencia.