Nebulización de anticuerpos específicos para virus influenza H1N1. Protocolo experimental para el análisis de estabilidad y comportamiento aerodinámico

Abstract

El virus Influenza A pertenece a la familia Orthomyxoviridae, posee una alta capacidad de mutagénesis y evade la respuesta inmune por vacunación, haciendo necesario el desarrollo de terapéuticos complementarios. La transmisión aérea de virus respiratorios que afectan el tracto respiratorio inferior, ocurre por gotas entre 1 y 5 µm. A mayor tamaño son deglutidas y a menor son exhaladas. La administración local por nebulización de anticuerpos neutralizantes permitiría el refuerzo de la respuesta inmune específica. Previamente describimos el efecto profiláctico de la administración intranasal de plasma inmune contra H1N1 y de nanoanticuerpos específicos. En este trabajo se estableció el protocolo experimental para analizar la estabilidad y el comportamiento aerodinámico de la nebulización de plasma hiperinmune contra H1N1. Con un sistema de impacto en cascada (NGI-Coplay), secciones con diferente tamaño de poro permitieron clasificar el tamaño de las gotas nebulizadas. Se evaluó la factibilidad de detección del plasma mediante diluciones similares a las obtenidas luego de la nebulización. El título por ELISA de hemaglutinina recombinante (HA) de 1/10240 indicó una detección efectiva. Una formulación de plasma:buffer fosfato pH 7.4 (1:5) nebulizada y cuantificada (280 nm) demostró una fracción fina de partículas (FFP) menor a 5 µm en más del 40%, indicando una adecuada aerosolización y deposición. Por ELISA-HA una señal positiva en las muestras colectadas señaló la estabilidad del suero. Esto demuestra que la técnica de ELISA-HA es apropiada para evaluar la estabilidad de los anticuerpos recuperados a partir de gotas de entre 1-5 µm.